GDF-5與兔椎間盤體外模型聯(lián)合誘導(dǎo)兔BMSCs向類髓核細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討GDF-5與兔椎間盤體外模型聯(lián)合誘導(dǎo)兔BMSCs向類髓核細(xì)胞分化的可行性，為下一步GDF-5轉(zhuǎn)染兔BMSCs聯(lián)合支架材料注入活體兔椎間盤模型奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：采用全骨髓細(xì)胞貼壁分離法培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，倒置相差顯微鏡觀察BMSCs形態(tài)，CD44、CD54免疫組化染色鑒定，PI染色測細(xì)胞周期，CCK-8檢測P3、P5、P7細(xì)胞增殖，檢測P3、P5、P7細(xì)胞貼壁率，RT-PCR檢測細(xì)胞二型膠原、蛋白多糖、MM

2、P1、MMP2、ADAMTs-5基因表達(dá)。分別用普通培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合兔椎間盤體外模型，培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。PI染色檢測細(xì)胞周期；CCK-8檢測細(xì)胞增殖；二型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍(lán)染色檢測二型膠原和蛋白多糖表達(dá)。
　　 結(jié)果：BMSCs形態(tài)呈梭形、紡錘形或多角形，境界清楚，表面抗原標(biāo)志物CD44、CD54免疫組化染色陽性，PI染色細(xì)胞周期顯示細(xì)胞

3、主要處于G0/G1期，P3、P5、P7代細(xì)胞增殖及貼壁率有衰減趨勢。BMSCs不表達(dá)二型膠原和蛋白多糖基因，表達(dá)MMP1、MMP2、ADAMTs-5基因。分別培養(yǎng)后，含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合椎間盤體外模型組，細(xì)胞形態(tài)變大變圓。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖，S期細(xì)胞數(shù)顯著增多，Ⅱ型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍(lán)染色：陰性。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合椎間盤體外模型組，細(xì)胞增殖初期顯