槐耳浸膏誘導人胃癌細胞系MKN28、SGC7901凋亡及抑制其MMPs表達的研究.pdf

1、目的：本實驗通過中藥制劑槐耳浸膏與不同分化水平胃癌細胞相互作用，檢測槐耳浸膏在抑制其增殖、促進凋亡、抑制MMP-2、MMP-9表達水平中的作用，為槐耳浸膏在臨床治療胃癌提供切實的理論依據(jù)。
　　 方法：常規(guī)貼壁培養(yǎng)人胃高、中分化腺癌細胞系MKN28、SGC7901，倒置顯微鏡觀察和MTT法檢測濃度為0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml的槐耳浸膏對MKN28和SGC7901細胞的增殖抑制作用；

2、應用免疫熒光雙染法(AO/EB)和流式細胞儀分別檢測濃度為0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28和SGC7901細胞系48h后細胞凋亡情況；濃度為0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml槐耳浸膏作用于MKN28細胞48小時后，RT-PCR法分別檢測MMP-2和MMP-9的mRNA表達水平。
　　 結果：
　　 濃度為0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml

3、的槐耳浸膏作用MKN28和SGC7901細胞系于24h、48h、72h后，倒置顯微鏡下觀察到各組均出現(xiàn)細胞體積縮小、膜破裂，核固縮碎裂等細胞凋亡的明顯征象；
　　 MTT法示：1、與未加藥組相比，濃度為0.5mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28細胞系24h、48h、72h后，抑制率分別為5.73％、7.50％、20.50％；1mg/ml濃度的抑制率分別為11.70％、13.83％、15.59％；3mg/ml濃度的抑制率分別為16

4、.06％、23.79％、24.73％；5mg/ml濃度的抑制率分別為24.91％、32.59％、34.67％；10mg/ml濃度的抑制率分別為30.98％、45.01％、46.15％。2、與未加藥組相比，濃度為0.5mg/ml的槐耳浸膏作用于SGC7901細胞系24h、48h、72h后，抑制率分別為2.43％、2.61％、5.60％；1mg/ml濃度的抑制率分別為5.63％、5.92％、13.70％；3mg/ml濃度的抑制率為12.48

5、％、19.83％、22.02％；5mg/ml濃度的抑制率為23.10％、30.37％、33.93％；10mg/ml濃度的抑制率29.68％、35.28％、37.03％。P<0.05，以上數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學差異；
　　 免疫熒光AO/EB雙染法檢測濃度為0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28和SGC7901細胞系48h后，其凋亡程度與藥物濃度均呈劑量依賴性；
　　 流式細胞儀結果示濃度為0mg/ml

6、、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28、SGC7901細胞系48h后，MKN28的凋亡率分別為41.76％、95.62％、94.13％；SGC7901的凋亡率分別為33.77％、83.74％、92.77％；
　　 RT-PCR法檢測濃度為0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28細胞系48h后，經(jīng)灰度分析示，其MMP-2/β-actin中mRNA表達分別為0.321、0.260、0.2

7、05，MMP-9/β-actin中mRNA的表達分別為0.244、0.192、0.135，隨著藥物濃度的增加，MMP-2、MMP-9中mRNA的表達水平下降。
　　 結論：實驗結果表明濃度為0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml的槐耳浸膏可抑制人胃高、中分化腺癌MKN28、SGC7901的細胞生長、誘導其凋亡，且呈劑量依賴性；隨著藥物作用時間延長，抑制率呈時間依賴性，其48h抑制率的增幅高于7