豬IgGⅡ類Fc受體（FcγRⅡ）基因克隆與表達(dá).pdf

1、Fc受體(FcR)為特異親和免疫球蛋白(Ig)Fc片段的細(xì)胞表面分子，廣泛表達(dá)于免疫輔助細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞，具有許多重要的生理功能，是體液免疫與細(xì)胞免疫的聯(lián)系紐帶，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。目前僅人和小鼠的三類IgGFc受體(FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγⅢ)研究的較為深入。 本研究利用生物信息學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，首次克隆了豬IgGⅡ類Fc受體cDNA，并通過(guò)玫瑰花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)(EA)進(jìn)一步鑒定了配體親和特性。即用人CD32氨基酸序

2、列檢索NCBI的EST數(shù)據(jù)庫(kù)(包括除人和老鼠以外的所有物種核苷酸序列)(tBLASTn)，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)高同源序列。再采用cDNA快速擴(kuò)增技術(shù)(RapidamplificationofcDNAends，RACE)從豬外周血白細(xì)胞cDNA中分別擴(kuò)增到了3’端、5’端以及全長(zhǎng)cDNA序列，獲得了豬IgGⅡ類Fc受體(FcγRⅡ)基因，命名為swFcγRⅡ。swFcγRⅡ全長(zhǎng)1488bp，編碼297個(gè)氨基酸的跨膜糖蛋白，包括兩個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域，胞內(nèi)

3、區(qū)含有基于酪氨酸的受體抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif，ITIM)。swFcγRⅡ氨基酸序列分別與人和老鼠的同源性為67％和52％。隨后，RT-PCR檢測(cè)到了swFcγRⅡmRNA在外周血白細(xì)胞、肝臟、肺臟和腸系膜淋巴結(jié)有較高表達(dá)。 將swFcγRⅡORF基因亞克隆到真核表達(dá)載體pcDNA構(gòu)建成重組質(zhì)粒pcDNA/swFcγRⅡ，再用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，用玫