ALCAM在子宮內膜惡性轉化中的作用.pdf

1、本文對ALCAM在子宮內膜惡性轉化中的作用進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：ALCAM在正常、增生和惡性子宮內膜組織中的表達。
　　 目的：子宮內膜癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，占女性生殖道惡性腫瘤的20％～30％。據(jù)子宮內膜癌的病因、病理和生物學行為的不同，通常將子宮內膜癌分為雌激素依賴型(Ⅰ型)和非雌激素依賴型(Ⅱ型)，其中以Ⅰ型(子宮內膜樣腺癌，本文研究的子宮內膜癌即為子宮內膜樣腺癌)最為多見，

2、約占子宮內膜癌的80％左右。子宮內膜樣腺癌的發(fā)病可能與無孕激素拮抗的雌激素持續(xù)刺激有關，但具體發(fā)病機制仍不清楚。ALCAM屬于免疫球蛋白超家族黏附分子，為Ⅰ型跨膜蛋白。ALCAM可以通過嗜異種黏附形式(ALCAM-CD6)和嗜同種黏附形式(ALCAM-ALCAM)介導細胞間黏附。在多種生理及病理過程中起作用。研究表明，ALCAM與多種惡性腫瘤的侵襲轉移相關，說明ALCAM表達的改變可能影響腫瘤細胞的黏附能力，進而影響腫瘤細胞侵襲過程。本

3、實驗通過檢測ALCAM在正常子宮內膜、增生性子宮內膜和子宮內膜癌組織中的表達狀態(tài)，分析ALCAM的表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系，探討ALCAM在子宮內膜惡性轉化及肌層浸潤機制中的作用。
　　 方法：收集20例正常增殖期子宮內膜、20例正常分泌期子宮內膜、15例單純性增生內膜、12例復雜性增生內膜、14例不典型增生內膜和42例子宮內膜癌組織標本。分別采用免疫組織化學染色法和western blot法檢測各組組織中ALCAM的

4、蛋白表達水平，用RT-PCR法檢測ALCAM的mRNA表達水平。
　　 結果：⑴ALCAM的陽性免疫組化染色定位于子宮內膜腺上皮細胞的胞膜及胞漿，間質無表達。從正常增殖期及分泌期內膜、單純性增生及復雜性增生內膜、到不典型增生內膜和子宮內膜癌組織，胞膜的ALCAM染色的強度逐漸增加。且在不典型增生內膜和子宮內膜癌組織中，胞膜ALCAM的染色強度顯著高于正常增殖期內膜、正常分泌期內膜、單純性增生內膜和復雜性增生內膜。在正常增殖期內膜

5、及正常分泌期內膜，胞漿內幾乎無ALCAM表達，ALCAM的胞漿染色從單純性增生內膜開始出現(xiàn)，也呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢。且在不典型增生內膜和子宮內膜癌組織中，ALCAM的染色強度顯著高于正常增殖期內膜、正常分泌期內膜、單純性增生內膜和復雜性增生內膜。在子宮內膜癌組織中，ALCAM的胞膜及胞漿出現(xiàn)并非均勻性染色。其中，23例(54.8％)組織中ALCAM為均勻性強染，8例(19％)組織以膜強染為主胞漿呈現(xiàn)中度染色，11例(26.2％)組織以胞漿

6、強染為主，胞膜呈現(xiàn)強弱不等的不均一性染色，在部分區(qū)域膜染色消失。⑵western blot檢測正常增殖期及分泌期內膜、單純性及復雜性增生內膜、不典型增生內膜和子宮內膜癌組織中ALCAM的蛋白表達，ALCAM的蛋白相對表達量分別為0.17±0.08、0.29±0.11、0.32±0.14、0.38±0.14、0.57±0.21和0.74±0.27，不典型增生內膜和子宮內膜癌組織中的ALCAM蛋白表達顯著高于正常子宮內膜和良性增生子宮內膜(

7、P<0.05)。⑶在粘膜內癌、肌層浸潤不超過1/2和肌層浸潤超過1/2的子宮內膜癌組織中，AL，CAM的蛋白相對表達量分別為0.53±0.19、0.74±0.18、0.81±0.24，有肌層浸潤的子宮內膜癌組織中ALCAM的蛋白表達顯著高于粘膜內癌者(P<0.05)。但肌層浸潤不超過1/2和肌層浸潤超過1/2的ALCAM蛋白表達水平無顯著差異。在G1、G2和G3級的子宮內膜癌組織中，ALCAM的蛋白相對表達量分別為0.62±0.19、0

8、.73±0.21、0.92±0.24，低分化組織內ALCAM的蛋白表達顯著高于高、中分化者(P<0.05)。在Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期子宮內膜癌中，ALCAM的蛋白相對表達量分別為0.66±0.17、0.75±0.23、0.81±0.24，各組間差異無統(tǒng)計學意義。⑷RT-PCR檢測正常增殖期及分泌期內膜、單純性及復雜性增生內膜、不典型增生內膜和子宮內膜癌組織中ALCAM的mRNA表達，ALCAM的mRNA相對表達量分別為0.24±0.04、0.33

9、±0.08、0.38±0.15、0.43±0.15、0.64±0.18和0.78±0.25，ALCAM在子宮內膜癌和不典型增生內膜組織中mRNA的表達顯著高于正常內膜、單純性增生內膜和復雜性增生內膜(P<0.05)。
　　 結論：ALCAM在不典型增生內膜及子宮內膜癌組織中表達顯著增高，ALCAM在子宮內膜的惡性轉化中發(fā)揮作用。伴有肌層浸潤的子宮內膜癌組織中ALCAM表達顯著高于粘膜內癌，提示ALCAM可能在子宮內膜癌浸潤中發(fā)揮

10、作用。
　　 第二部分：孕激素對不同子宮內膜癌細胞系ALCAM表達的影響。
　　 目的：子宮內膜癌的發(fā)病可能與無孕激素拮抗的雌激素持續(xù)刺激相關。孕激素治療子宮內膜癌可使子宮內膜癌的腺體向良性逆轉，其治療子宮內膜癌的具體分子機制尚不清楚。本實驗通過檢測子宮內膜癌細胞系Ishikawa及KLE中ALCAM的表達狀態(tài)，及孕激素處理前后ALCAM表達的變化。分析ALCAM表達狀態(tài)與孕激素關系，探討子宮內膜癌治療中孕激素拮抗的可能

11、機制。
　　 方法：分別用濃度分別為10mg/l、15mg/l、20mg/l、25mg/l、30mg/l的醋酸甲地孕酮(MA)刺激培養(yǎng)子宮內膜癌細胞24、36、48小時，MTT法檢測細胞生長的抑制率，選擇最佳半抑制濃度。細胞組織化學染色觀察MA處理后Ishikawa及KLE細胞中ALCAM蛋白表達變化，western blot半定量分析MA處理后ALCAM的蛋白表達變化，RT-PCR測定MA處理后ALCAM mRNA的表達變化。

12、細胞劃痕實驗檢測孕激素處理后細胞遷移率的變化。未用藥物處理組做對照組。
　　 結果：⑴MA能抑制子宮內膜癌細胞系Ishikawa的生長，濃度為20mg/l作用48小時時Ishikawa細胞生長抑制率達50％。MA對KLE細胞的生長無明顯的抑制作用。⑵細胞組織化學染色顯示，Ishikawa及KLE細胞的ALCAM染色均位于胞漿，胞膜無染色。在Ishikawa細胞，ALCAM呈中度染色。KLE細胞染色較Ishikawa細胞染色強。M

13、A處理后Ishikawa細胞ALCAM染色強度減弱，而KLE細胞的染色強度無顯著變化。⑶Ishikawa細胞對照組與MA處理組的ALCAM蛋白相對表達量分別為1.13±0.23和0.64±0.18；ALCAM mRNA相對表達量分別為0.88±0.27與0.33±0.17。KLE細胞對照組與MA處理組的ALCAM蛋白相對表達量分別為1.33±0.37和1.27±0.25；ALCAM mRNA相對表達量分別為1.14±0.36和0.93±