低分子肝素時(shí)段干預(yù)急性壞死性胰腺炎大鼠微循環(huán)障礙實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究不同時(shí)段LMWH給藥干預(yù)對(duì)ANP大鼠血PAF、ET-1、NO、TXA2、PGI2變化影響，觀察ANP大鼠72小時(shí)生存時(shí)間并統(tǒng)計(jì)生存率，探討不同時(shí)段LMWH給藥干預(yù)對(duì)ANP大鼠胰腺微循環(huán)的作用，為臨床LMWH最佳時(shí)段治療重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:健康SD大鼠160只，體重250-300g，隨機(jī)分成LMWH組(L組)，n=64只；生理鹽水(

2、normal saline,NS)組（N組）,n=64只；假手術(shù)(sham operation, SO)組（S組），n=32只。L組和N組根據(jù)不同給藥時(shí)點(diǎn)又隨機(jī)再各分成四個(gè)組即L0h組(n=16)、L6h組(n=16)、L12h組(n=16)、L18h組(n=16)和N0h組(n=16)、N6h組(n=16)、N12h組(n=16)、N18h組(n=16)。L和N組大鼠均采用5％?；悄懰徕c（0.1ml/100g）微泵下逆行胰膽管注射法建

3、立ANP模型，S組大鼠開腹僅翻動(dòng)胰腺建模。L組大鼠分別于ANP成模后0時(shí)（L0h）、6時(shí)（L6h）、12時(shí)（L12h）、18時(shí)（L18h）皮下注射LMWH（尤尼舒50IU/ml,10IU/100g體重/次)，各組每6小時(shí)重復(fù)注射一次，直至成模后24小時(shí)；N組大鼠ANP成模后各時(shí)點(diǎn)，同L組皮下注射NS(0.2ml/100g體重/次）。三組大鼠均于ANP成模后24小時(shí),隨機(jī)取每組大鼠數(shù)量的1/2再次開腹，觀察腹水量及顏色、腹腔內(nèi)皂化斑以及胰

4、腺大體改變，取門靜脈血檢測血PAF、TXB2（TXA2）、6-Keto-PGF1α（PGI2）、ET-1、NO、血AMY和血Ca2+濃度，取胰腺組織HE染色病理學(xué)檢查并行胰腺組織病理學(xué)評(píng)分，透射電鏡觀察胰腺微血管血栓，三組余下1/2數(shù)量大鼠繼續(xù)禁食、自由飲水，觀察72生存時(shí)間并統(tǒng)計(jì)生存率。
　　結(jié)果:
　　1.腹腔大體情況：L、N、S三組大鼠ANP建模后24h隨機(jī)各取1/2再次剖腹所見：L組大鼠腹腔內(nèi)可見黃色微混濁性腹水，腸

5、系膜上點(diǎn)狀皂化斑，胰腺點(diǎn)片狀出血壞死；N組大鼠腹腔內(nèi)可見淡紅色血性腹水，腸系膜上片皂化斑形成，胰腺片狀出血、壞死；S組大鼠未見上述改變。
　　2.血液指標(biāo)檢測血Ca2+和AMY：L組大鼠各時(shí)段血Ca2+濃度均高于N組大鼠相應(yīng)各時(shí)段Ca2+濃度(P<0.01)；L組大鼠各時(shí)段血AMY濃度亦均低于N組相應(yīng)各時(shí)段AMY濃度(P<0.01)；L和N兩組大鼠血Ca2+、AMY濃度各組內(nèi)不同時(shí)段兩兩比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。血PAF：

6、L組大鼠各時(shí)段組血 PAF濃度均低于N組大鼠相應(yīng)時(shí)段組濃度(P<0.01)，L0h組（6.559±0.748）和L6h組（6.369±0.712）均低于L12h組（7.323±0.323）(P<0.01)和L18h組（7.343±0.615）(P<0.05)；L0h組（6.559±0.748）與L6h組（6.369±0.712）之間及L12h組（7.323±0.323）與L18h組（7.343±0.615）之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.

7、05)。
　　血TXB2（TXA2）、6-Keto-PGF1α：L組大鼠血TXB2（TXA2）、6-Keto-PGF1α各時(shí)段組濃度均低于N組大鼠相應(yīng)各時(shí)段組血 TXB2（TXA2）、6-Keto-PGF1濃度(P<0.01)；L0h組血TXB2（TXA2）（39.386±2.089）和血6-Keto-PGF1α（52.550±1.047）與L6h組血TXB2（TXA2）（40.220±2.338）和血6-Keto-PGF1α濃度

8、（52.374±1.604）均低于L12h組血 TXB2（TXA2）（57.384±3.838）(P<0.01)和血6-Keto-PGF1α（57.743±1.504）(P<0.01)與 L18h組血 TXB2（TXA2）（57.924±4.262）(P<0.01)和血6-Keto-PGF1α濃度（58.093±1.189）(P<0.01)；而 L0h組與L6h組之間及L12h組與L18h組之間組血TXB2、血6-Keto-PGF1α濃

9、度比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　血ET-1、NO: L組大鼠血ET-1、NO各時(shí)段組濃度均低于N組大鼠相應(yīng)各時(shí)段組血ET-1、NO濃度(P<0.05)；L0h組（81.753±7.227）和L6h組大鼠血ET-1濃度（80.358±8.270）均低于L12h組（92.971±6.849）(P<0.05)和L18h組（95.553±6.903）(P<0.01)；但L0h組與L6h組之間及L12h組與L18h組之間組血ET-

10、1濃度比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；各時(shí)段組大鼠NO濃度兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　3.組織學(xué)檢查胰腺組織HE染色病理學(xué)檢查：N組大鼠可見胰腺腺泡細(xì)胞破裂，腺泡結(jié)構(gòu)消失，大片狀出血壞死明顯，大量中性粒細(xì)胞浸潤；L組大鼠可見胰腺腺泡細(xì)破裂較N組少,成點(diǎn)片狀出血壞死,尚存較少的正常腺泡細(xì)胞,較多中性粒細(xì)胞浸潤；S組大鼠胰腺腺葉結(jié)構(gòu)存在，腺泡細(xì)胞完整，未見壞死、出血及炎癥細(xì)胞浸潤。
　　胰腺組織病理學(xué)評(píng)分：

11、L0h組（6.000±0.926）、L6h組（6.500±1.069）、L12h組（8.750±1.283）、L18h組（8.250±1.670）大鼠胰腺組織病理學(xué)評(píng)分分別低于N組相應(yīng)各時(shí)段N0h組(10.000±0.756)(P<0.01)、N6h組（10.250±1.282）(P<0.01)、N12h組（10.500±1.195）(P<0.01)、N18h（8.250±1.670）(P<0.01)組大鼠胰腺組織病理學(xué)評(píng)分；而L0h組

12、（6.000±0.926）和L6h組（6.500±1.069）大鼠胰腺組織病理學(xué)評(píng)分均低于L12h組（8.750±1.283）(P<0.01)和L18h組（8.250±1.670）(P<0.01)，但 L0h組（6.000±0.926）與L6h組（6.500±1.069）之間及L12h組（8.750±1.283）與L18h組（8.250±1.670）大鼠之間胰腺組織病理學(xué)評(píng)分比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　透射電鏡：N組大

13、鼠可見胰腺腺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，正常胰腺腺泡消失，大量壞死組織，大量微血栓形成，血管破裂，殘存微血管內(nèi)有中性粒細(xì)胞滯留；L組大鼠可見血管內(nèi)微血栓形成較N組少，尚存少量正常胰腺腺泡細(xì)胞。S組大鼠血管內(nèi)無血栓形成，胰腺腺泡細(xì)胞、結(jié)構(gòu)完整。
　　三組大鼠各時(shí)段胰腺組織病理學(xué)評(píng)分與血PAF、ET-1/NO、TXB2/6-Keto-PGF1α（TXA2/PGI2）相關(guān)系數(shù)r分別為0.808、0.835、0.736，均呈正相關(guān)關(guān)系（P<0.01）

14、。
　　大鼠生存時(shí)間：L組48h、72h生存率分別為71.87％和46.87％，高于N組48h(43.75％)（P<0.05）和72h(21.87％)（P<0.05）生存率，但低于SO組48 h(100％)（P<0.05）和72 h(100％）（P<0.05）生存率。
　　結(jié)論:
　　(1)LMWH皮下注射可通過降低 ANP大鼠血 PGI2、ET-1、NO、TXA2、濃度和ET-1/NO、TXA2/PGI2改善胰腺微循