痔愈噴劑的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　觀察痔愈噴劑的抗炎、鎮(zhèn)痛作用及促進(jìn)皮膚創(chuàng)面修復(fù)機(jī)制，為臨床使用該藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.第一部分:痔愈噴劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究
　　1.1醋酸扭體鎮(zhèn)痛選擇體重18～22g健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(生理鹽水10ml/kg)、痔愈噴劑低劑量組(0.08g生藥/ml)、痔愈噴劑中劑量組(0.16g生藥/ml)、痔愈噴劑高劑量組(0.32g生藥/ml)及陽性對(duì)照

2、組（濕潤(rùn)燒傷膏）。動(dòng)物經(jīng)8％硫化鈉脫毛后，連續(xù)3天皮膚給藥。最后一次給藥1h后，腹腔注射0.7％冰醋酸(10ml/kg)(醋酸溶液臨用前配制)，記錄各組小鼠給藥后15min內(nèi)扭體（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高）的次數(shù)。醋酸扭體實(shí)驗(yàn)給藥前、實(shí)驗(yàn)后1h用10％水合氯醛麻醉，每次10只，取腹主動(dòng)脈血5 ml采用ELISA法檢測(cè)血清中IL-6。按ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）說明書操作。
　　1.2熱板鎮(zhèn)痛法挑選痛閾在

3、5-30s內(nèi)的昆明種雌性小鼠50只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(生理鹽水10ml/kg)、痔愈噴劑低劑量組(0.08g生藥/ml)、痔愈噴劑中劑量組(0.16g生藥/ml)、痔愈噴劑高劑量組(0.32g生藥/ml)及陽性對(duì)照組（濕潤(rùn)燒傷膏組）。小鼠經(jīng)8％硫化鈉脫毛后，連續(xù)3天皮膚給藥。將智能熱板儀溫度調(diào)整到55℃后，用秒表記錄小鼠從投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間(s)作為該鼠的痛閾值。
　　1.3角叉菜膠對(duì)足跖腫脹的影響取SD大鼠50只，隨機(jī)

4、分為空白對(duì)照組(生理鹽水組10ml/kg)、痔愈噴劑低劑量組(0.08g生藥/ml)、痔愈噴劑中劑量組(0.16g生藥/ml)、痔愈噴劑高劑量組(0.32g生藥/ml)及陽性對(duì)照組(0.5mg/ml阿司匹林)，空白對(duì)照組及陽性組每天予大鼠灌胃1次，痔愈噴劑各組每天皮膚給藥1次，連續(xù)給藥3d。最后一次給藥后1h，分別給予大鼠右后足跖腱膜下注射角叉菜膠0.1ml/只致炎。致炎后1～1.5h內(nèi)，分別于注入0.5h、1h、1.5h后用游標(biāo)卡尺測(cè)

5、量腫脹肢體厚度，計(jì)算抑制率。腫脹度(％)=（致炎后足跖容積值-致炎前足跖容積值）/致炎前足跖容積值×100％。隨后致炎后足剪碎研磨后按5％的濃度浸泡于生理鹽水中1h，將浸泡液冷凍離心10min(轉(zhuǎn)速3000 r/min)，取上清液，凍存于-80℃低溫冰箱內(nèi)，用于炎癥組織中PGE2的測(cè)定。
　　2.第二部分:痔愈噴劑促進(jìn)動(dòng)物創(chuàng)面修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究
　　30只SD大鼠隨機(jī)分為痔愈噴劑組、空白對(duì)照組、濕潤(rùn)燒傷膏組。制備大鼠皮膚創(chuàng)傷模型，

6、分別于造模后第1天、7天、14天、21天，取創(chuàng)傷周圍少量皮膚組織。觀察大鼠皮膚創(chuàng)面形態(tài)及病理改變，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察創(chuàng)面中TGF-β1表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.第一部分痔愈噴劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究:
　　1.1實(shí)驗(yàn)1:痔愈噴劑和濕潤(rùn)燒傷膏可明顯減少醋酸致小鼠扭體次數(shù)，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，痔愈噴劑高劑量與濕潤(rùn)燒傷膏組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.472)。痔愈噴劑高劑量與中、

7、低劑量相比有顯著性差異(P＜0.01)，中、低劑量組之間無顯著性差異。結(jié)果表明痔愈噴劑對(duì)醋酸腹腔注射所致的小鼠內(nèi)臟疼痛有抑制作用。痔愈噴劑各組能降低炎癥引起的IL-6升高，與濕潤(rùn)燒傷膏組比較無顯著差異。
　　1.2實(shí)驗(yàn)2:痔愈噴劑各組與濕潤(rùn)燒傷膏都能明顯延遲小鼠的舔后足時(shí)間，提高小鼠痛閾值，與空白對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。痔愈噴劑高劑量組與中、低劑量之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，痔愈噴劑中、低劑量組無

8、顯著性差異(P＞0.05)。
　　1.3實(shí)驗(yàn)3:痔愈噴劑各組與阿司匹林組比較，痔愈噴劑各組與阿司匹林組均能明顯抑制均能明顯抑制角叉菜膠所引起的足跖腫脹程度，與空白對(duì)照組比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);痔愈噴劑各組之間無顯著差異性(P＞0.05)。結(jié)果表明結(jié)果表明痔愈噴劑具有一定的抗炎活性。痔愈噴劑各組能降低炎癥引起的PGE。升高，與阿司匹林組比較無顯著差異。
　　2.第二部分痔愈噴劑促進(jìn)動(dòng)物創(chuàng)面修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究
　

9、　痔愈噴劑能加快大鼠皮膚創(chuàng)面愈合。結(jié)果顯示:傷后第1d，各組之間的愈合率無明顯差別(P＞0.05)，創(chuàng)傷后7d、14d、21d，痔愈噴劑組和濕潤(rùn)燒傷膏組創(chuàng)面愈合速度加快，面積較凡士林組縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);痔愈噴劑組和濕潤(rùn)燒傷膏組創(chuàng)面愈合面積比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.痔愈噴劑能顯著減少小鼠的扭體次數(shù);延遲小鼠的舔后足時(shí)間，提高小鼠痛閾值;能明顯抑制角叉菜膠所引起的足跖腫脹程

10、度，具有較好的的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。痔愈噴劑抗炎、鎮(zhèn)痛作用機(jī)制可能與抑制炎癥因子IL-6、PGE2的表達(dá)有關(guān)。
　　2.TGF-β1表達(dá)量在痔愈噴劑組與濕潤(rùn)燒傷膏組皮膚組織多于凡士林組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。這表明創(chuàng)面局部TGF-β1的含量多少可能是痔愈噴劑促進(jìn)創(chuàng)面愈合形成的機(jī)制之一。痔愈噴劑組具有明顯的增加創(chuàng)面肉芽組織中TGF-β1含量的作用，從而促進(jìn)創(chuàng)面膠原的合成，在后期組織重建時(shí)又可降低TGF-β1含量，促進(jìn)膠原降解