OATP1B1-BCRP-MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性對(duì)心血管藥物體內(nèi)過(guò)程影響的研究.pdf

1、人體對(duì)藥物反應(yīng)(包括藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué))的巨大個(gè)體差異源于機(jī)體內(nèi)各種功能蛋白的分子變異。有關(guān)分子變異的研究,主要集中在基因變異對(duì)于上述蛋白的表達(dá)和功能的影響。雖然肝藥酶的基因多態(tài)性已有廣泛研究,但是有關(guān)肝腎轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因變異研究較少。根據(jù)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)方式,藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體可分為外排轉(zhuǎn)運(yùn)體(MDR1、MRP、BCRP等)和攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體(OATP、OAT1等)兩種主要類(lèi)型,藥物攝取和外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的聯(lián)合作用是藥物吸收和消除過(guò)程中的關(guān)鍵性因素。
　　

2、 OATP1B1/BCRP/MRP2組合代表了在有機(jī)陰離子藥物肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要作用的三大轉(zhuǎn)運(yùn)體。藥物先經(jīng)由OATP1B1攝取,隨后通過(guò)BCRP或MRP2排泄,構(gòu)成了藥物肝膽排泄的矢量轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。它們的轉(zhuǎn)運(yùn)功能受各自特定的基因多態(tài)性影響,并直接影響底物藥物的藥物代謝特征及其藥理、毒理效應(yīng)。系統(tǒng)研究OATP1B1/BCRP/MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性對(duì)底物藥物體內(nèi)過(guò)程的影響十分重要。目前國(guó)外有關(guān)OATP1B1/BCRP/MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性

3、影響心血管藥物的綜合研究多處于體外細(xì)胞水平,而在人體整體狀態(tài)下進(jìn)行該轉(zhuǎn)運(yùn)體組合對(duì)藥物體內(nèi)過(guò)程的影響研究較少,國(guó)內(nèi)此方面的研究尚為空白。
　　 鑒于OATP1B1/BCRP/MRP2在介導(dǎo)人體生理功能和藥理效應(yīng)中的重要作用,及其在藥物肝膽轉(zhuǎn)運(yùn)矢量過(guò)程中的協(xié)同作用,本課題選擇OATP1B1/BCRP/MRP2在心血管藥物中的共同底物纈沙坦、匹伐他汀、瑞舒伐他汀和依那普利作為研究藥物,系統(tǒng)研究OATP1B1/BCRP/MRP2各等位基

4、因多態(tài)性在藥物體內(nèi)過(guò)程中的作用,明確主要效應(yīng)基因,探討臨床用藥出現(xiàn)個(gè)體差異的機(jī)制,為臨床實(shí)施基因?qū)蛐詡€(gè)體化用藥提供依據(jù)。
　　 研究?jī)?nèi)容及結(jié)果:
　　 本研究包括5部分內(nèi)容,共入選136名受試者,在查明OATP1B1、BCRP和MRP2常見(jiàn)基因突變?cè)谥袊?guó)漢族人群分布特征的基礎(chǔ)上,通過(guò)嚴(yán)格設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn),在人體整體水平下,探討OATP1B1/BCRP/MRP2基因多態(tài)性對(duì)臨床重要的心血管藥物底物(依那普利、纈沙坦、匹伐他

5、汀、瑞舒伐他汀)體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的綜合影響。
　　 第一部分 OATP1B1、BCRP和MRP2基因多態(tài)性在中國(guó)漢族人群中的分布
　　 研究目的:
　　 查明OATP1B1、BCRP和MRP2的主要突變位點(diǎn)(OATP1B1:521T>C和388A>G:BCRP:421C>A和34G>A；MRP2:-24C>T和3972C>T)在中國(guó)健康男性漢族人群中的分布。
　　 研究方法:
　　 1.研究對(duì)象:招募

6、136名漢族健康男性受試者,彼此間無(wú)血緣關(guān)系。
　　 2.基因多態(tài)性檢測(cè):采用直接測(cè)序法對(duì)以下各轉(zhuǎn)運(yùn)體相關(guān)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型,包括:
　　 (1)有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽OATP1B1:521T>C和388A>G;
　　 (2)乳腺癌耐藥蛋白BCRP:421C>A和34G>A；
　　 (3)多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP2:-24C>T和3972C>T。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.在健康中國(guó)男性人群中,

7、OATP1B1521T>C和388A>G突變等位基因的發(fā)生頻率為11.8％和73.2％。
　　 2.BCRP421C>A和34G>A突變等位基因的發(fā)生頻率為30.5％和34.6％。
　　 3.MRP2-24C>T和3972C>T突變等位基因的發(fā)生頻率為18.8％和19.5％。
　　 4.以上基因突變均為中國(guó)人群中的常見(jiàn)突變,其發(fā)生頻率與日本、韓國(guó)等亞裔人種接近,但與白種人和黑人顯著不同,可反映中國(guó)人群基因頻率分布

8、特征。
　　 第二部分 OATP1B1和MRP2基因多態(tài)性對(duì)依那普利人體藥代動(dòng)力學(xué)的影響
　　 研究目的:
　　 探討OATP1B1和MRP2基因多態(tài)性對(duì)依那普利及其活性代謝物依那普利拉人體藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　 研究方法:
　　 1.研究對(duì)象:共32名健康男性受試者入選本研究。按以下方式分組:
　　 (1)OATP1B1521T>C基因型:521TC-CC突變組(n=6),521TT野

9、生組(n=26):
　　 (2)為研究MRP2影響,在排除OATP1B1521T>C變異影響后,對(duì)521TT野生型受試者(n=26)按MRP2-24C>T位點(diǎn)進(jìn)行分組:-24CC野生型(n=16),-24CT+TT突變型(n=10)。
　　 2.試驗(yàn)設(shè)計(jì):受試者每日口服規(guī)定劑量的依那普利,連續(xù)7天；采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS/MS)同時(shí)測(cè)定血漿中的依那普利和依那普利拉濃度。
　　 研究結(jié)果:

10、r>　　 1.受試者單次和連續(xù)口服依那普利后,OATP1B1521TC-CC突變組的依那普利血藥濃度顯著高于521TT野生組(P=0.048)。
　　 2.與依那普利相反,依那普利拉在521TC-CC突變組的AUC和Cmax顯著低于521TT野生組(P=0.040和0.027)。
　　 3.對(duì)于521TT野生純合子受試者,未發(fā)現(xiàn)依那普利和依那普利拉的PK參數(shù)與388A>G有關(guān)。
　　 4.MRP2-24C>T基

11、因多態(tài)性不影響依那普利原型的體內(nèi)動(dòng)力學(xué),但依那普利拉在-24CC野生型組的AUCss和Cav均顯著高于-24CT-TT突變組(P=0.038)。
　　 第三部分OATP1B1388A>G和MRP2基因多態(tài)性對(duì)纈沙坦人體藥代動(dòng)力學(xué)的影響
　　 研究目的:
　　 觀察OATP1B1388A>G和MRP2-24C>T基因多態(tài)性對(duì)中國(guó)健康受試者纈沙坦藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　 研究方法:
　　 1.研究對(duì)象

12、:入選23名OATP1B1521Tr野生型受試者,按以下方式分組:
　　 (1)OATPlB1388A>G基因型:388GG突變純合子組14名,388AA-AG雜合子組9名。
　　 (2)MRP2-24C>T基因型:-24CC野生型(n=15),-24CT-TT突變型(n=8)。
　　 2.試驗(yàn)設(shè)計(jì):受試者單劑量口服纈沙坦80 mg,采用HPLC—MS/MS法測(cè)定血漿纈沙坦?jié)舛取?br>　　 研究結(jié)果:

13、　　 1.OATP1B1388A>G顯著影響纈沙坦主要PK參數(shù),388AA-AG組的AUC0-48和AUC0-∞較388GG組高51％,Cmax較388GG組高39％,t1/2和tmax在2組之間未顯示出差異(P>0.05)。
　　 2.纈沙坦各PK參數(shù)在MRP2-24CC野生組和-24CT-TT突變組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 第四部分 OATP1B1和BCRP基因多態(tài)性對(duì)匹伐他汀人體藥代動(dòng)力學(xué)的影響<

14、br>　　 研究目的:
　　 比較研究OATP1B1和BCRP基因多態(tài)性對(duì)匹伐他汀及其主要代謝物匹伐他汀內(nèi)酯人體藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　 研究方法:
　　 1.研究對(duì)象:入選24名健康男性受試者,經(jīng)基因分型檢查分為以下3組:
　　 Group1:OATP1B1521TT野生型/BCRP421CC野生型,n=7；
　　 Group2:OATP1B1521TC-CC突變型/BCRP421CC野生型,

15、n=6；
　　 Group3:OATP1B1521TT野生型/BCRP421CA-AA突變型,n=11；
　　 2.試驗(yàn)設(shè)計(jì):受試者單劑量口服匹伐他汀2 mg,采用HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定血漿匹伐他汀及其內(nèi)酯型代謝物濃度。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.在排除BCRP421C>A影響后,匹伐他汀在OATP1B1521TT野生型純合子組(Group1)的AUC0-t(P=0.012)和Cmax(P=0.

16、007)顯著低于521TC+CC突變組(Group2)；
　　 2.排除OATP1B1521T>C影響后,匹伐他汀的主要PK參數(shù)(AUC0-t、AUC0-∞、Cmax、Tmax和t1/2)在BCRP421CC野生純合子組(Group1)和421CA+AA突變組(Group3)之間無(wú)顯著性差異(P>0.05):
　　 3.匹伐他汀內(nèi)酯的主要PK參數(shù)在3組間無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
　　 第五部分 OATP1B

17、1/BCRP/MRP2基因多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀人體藥代動(dòng)力學(xué)的影響
　　 研究目的:
　　 比較研究OAP1B1/BCRP/MRP2基因多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀單劑量和多劑量連續(xù)給藥后人體藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　 研究方法:
　　 1.研究對(duì)象:共24名健康男性受試者入選本研究。按以下方式分組:
　　 (1)OATP1B1521T>C基因型:521TT野生組(n=15),521TC+CC突變組(n=9)；

18、
　　 (2)BCRP421 C>A基因型:421CC野生組(n=15)；421CA+AA突變組(n=9)；
　　 (3)MRP2-24C>T基因型:-24CC野生組(n=13),-24CT+TT突變組(n=11)。
　　 2.試驗(yàn)設(shè)計(jì):受試者每日口服規(guī)定劑量的瑞舒伐他汀,連續(xù)7天；每日按規(guī)定時(shí)間點(diǎn)采集受試者血樣和尿樣；采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS/MS)測(cè)定血漿和尿樣中的瑞舒伐他汀濃度。

19、　　 研究結(jié)果:
　　 1.單劑量給藥后,瑞舒伐他汀在BCRP421CA+AA突變組的AUC0-t、Cmax和尿藥排泄百分?jǐn)?shù)Percent—excretion顯著高于421CC野生型組(P=0.030、0.015和0.041),半衰期t1/2和達(dá)峰時(shí)間Tmax在兩組人群中無(wú)差異(P>0.05)。
　　 2.與單劑量結(jié)果不同,多劑量連續(xù)給藥達(dá)穩(wěn)態(tài)后,穩(wěn)態(tài)AUCss、Cmax、總清除率CLtotal_ss/F和腎清除率CL

20、R_ss在野生型組和突變組之間均無(wú)顯著性差異(P>0.05),但半衰期t1/2在野生組顯著延長(zhǎng)(14.14±3.1 vs11.8±2.2 h,P=0.035),且野生組的蓄積比Rac也高于突變組(P=0.064)。
　　 3.此外,瑞舒伐他汀的各主要PK參數(shù)(AUC、Cmax、Tmax、t1/2、CLtotal/F、CLR、Percent_excretion)在OATP1B1521TT野生組和521TC+CC突變組之間,以及在M

21、RP2-24CC野生組和MRP2-24CT+TT突變組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 三研究結(jié)論:
　　 1.OATP1B1和MRP2基因多態(tài)性可顯著影響依那普利和依那普里拉的體內(nèi)PK特征,依那普利拉在同時(shí)具有OATP1B1521TT野生型和MRP2—24CC野生型受試者體內(nèi)的暴露量顯著高于這兩個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)體位點(diǎn)均發(fā)生突變的受試者。
　　 2.在排除OATP1B1521T>C基因多態(tài)性的影響后,388A>G基

22、因多態(tài)性是影響纈沙坦藥代動(dòng)力學(xué)特性的重要因素；而MRP2-24C>T基因多態(tài)性對(duì)纈沙坦藥代動(dòng)力學(xué)無(wú)影響。
　　 3.OATP1B1基因多態(tài)性顯著影響匹伐他汀人體藥代動(dòng)力學(xué)特征,但對(duì)匹伐他汀內(nèi)酯無(wú)影響；BCRP421C>A突變與匹伐他汀及其內(nèi)酯的藥代動(dòng)力學(xué)改變無(wú)關(guān)。
　　 4.與匹伐他汀不同,BCRP421C>A基因多態(tài)性是影響瑞舒伐他汀人體藥代動(dòng)力學(xué)改變的重要因素；MRP2-24C>T和OATP1B1521T>C變異對(duì)瑞