豬卵泡抑制素主動(dòng)免疫對(duì)肉羊繁殖性能的影響.pdf

1、采集新鮮的離體豬卵巢，在4℃條件下收集卵泡液。將豬卵泡液于4℃條件下用活性碳處理24h，以充分吸附除去卵泡液中的類固醇激素離心除去活性碳，加入-20C的無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到86﹪(V/V)以上，混勻使卵泡液中的蛋白成分充分沉淀，收集管底的沉淀，將所得沉淀溶于20mL0.01mol/L，pH7.0PBS，進(jìn)行SephadexG-100凝膠過濾層析，層析過程中經(jīng)核酸蛋白檢測(cè)儀記錄下兩個(gè)蛋白質(zhì)峰即峰A、峰B，分別收集兩峰的產(chǎn)物，用SDS-

2、聚丙烯酰氨電泳的方法，借助標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)和豬卵泡液抑制素標(biāo)準(zhǔn)品分析A、B兩峰的產(chǎn)物，試驗(yàn)結(jié)果表明抑制素主要在A峰內(nèi)。通過hCG對(duì)純種昆明系封閉群清潔級(jí)30日齡性成熟前母鼠卵巢增重抑制法測(cè)定過濾層析產(chǎn)物的抑制素活性。試驗(yàn)結(jié)果表明峰A有較強(qiáng)的抑制素生物活性，對(duì)hCG促卵巢增重的抑制效果顯著(P＜0.05)；峰B和豬卵泡液對(duì)hCG促卵巢增重沒有抑制效果。用A峰的凍干物加入弗氏佐劑制成免疫抗原對(duì)肉羊進(jìn)行三次免疫，其中首免用完全弗氏佐劑，兩次加強(qiáng)免疫

3、用不完全弗氏佐劑，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了1個(gè)對(duì)照組和3個(gè)不同的劑量組分別為1ml劑量組、1.5ml劑量組、2ml劑量組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組10只羊的血清中未檢測(cè)出抑制素抗體。在三個(gè)不同的劑量組羊中首次免疫10d后除個(gè)別試驗(yàn)羊外均可檢測(cè)到抑制素抗體，但抗體滴度較低，且在二免前首免所產(chǎn)生的抗體水平有所降低。加強(qiáng)免疫后血液中的抗體水平逐漸升高，但1ml劑量組，和1.5ml劑量組抗體水平仍較低，只有2ml劑量組試驗(yàn)羊在兩次加強(qiáng)免疫后產(chǎn)生了效價(jià)較高的均勻而穩(wěn)

4、定的抑制素抗體。在首次免疫前各劑量組與試驗(yàn)對(duì)照組血清中的FSH濃度差異不顯著，在第一次免疫后2ml劑量組的FSH濃度就顯著高于對(duì)照組，而1ml劑量組和1.5ml劑量組血清中的FSH濃度雖略有升高，但與對(duì)照組羊的血清中FSH濃度的差異不顯著。經(jīng)過兩次加強(qiáng)免疫以后，試驗(yàn)1和試驗(yàn)2組羊血清中的FSH含量雖然略高于對(duì)照組的，但是差異不顯著。三次免疫后試驗(yàn)羊經(jīng)手術(shù)方法觀察卵巢變化，可見卵巢呈淡粉紅色，上面有鮮紅色的黃體和透明的卵泡，個(gè)別羊卵巢上有