版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
通過觀察不同濃度碘對體外培養(yǎng)大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞的增殖或凋亡作用,探討高碘對動脈血管的損傷作用及其機(jī)制。
方法:
大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞(A7r5)置于37℃,5%CO2,飽和濕度條件下培養(yǎng)。細(xì)胞處于對數(shù)生長期時進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為對照組和加碘組:加碘組根據(jù)碘濃度范圍(0.075~7500mg/L)分為22組,以空白作為對照組。連續(xù)培養(yǎng)12h、24h和48h后分別收集細(xì)胞待用。采用細(xì)胞計
2、數(shù)法檢測細(xì)胞數(shù)量;四唑鹽(Methylthiazolyltetrazolium,MTT)比色法測定細(xì)胞活性;瑞氏-吉姆薩染色(Wrigh-Giemastaining)觀測細(xì)胞形態(tài);吖啶橙熒光染色(Acridineorangstaining)觀測細(xì)胞凋亡形態(tài);AnnexinV/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reversetranscriptionpolymersadechainreaction,RT-PCR)檢測培
3、養(yǎng)細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因片段baxmRNA,bcl-2mRNA的表達(dá)水平;采用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(WesternBloting)測定ASK-1和TRX-1蛋白的表達(dá)水平。統(tǒng)計方法:多組間比較采用方差分析,兩兩比較采用Dunnettt檢驗(yàn)。
結(jié)果:
1.細(xì)胞計數(shù)
加含不同濃度的碘培養(yǎng)液分別培養(yǎng)12、24、48小時。細(xì)胞培養(yǎng)12小時后,加碘組與對照組相比,碘濃度范圍為0.075~3750mg/L時,細(xì)胞
4、生長正常(P>0.05),碘濃度為5250mg/L時可以明顯抑制細(xì)胞的生長(P<0.01),抑制作用與碘濃度呈正相關(guān)關(guān)系;細(xì)胞培養(yǎng)24小時后,加碘組與對照組相比,碘濃度范圍為0.075~1500mg/L時,細(xì)胞生長正常(P>0.05),碘濃度為3000mg/L時可以明顯抑制細(xì)胞的生長(P<0.01),抑制作用與碘濃度呈正相關(guān)關(guān)系;細(xì)胞培養(yǎng)48小時后,加碘組與對照組相比,碘濃度為0.075~1120mg/L時,細(xì)胞生長正常(P>0.05)
5、,碘濃度為2250mg/L時可以明顯抑制細(xì)胞的生長(P<0.01),抑制作用與碘濃度呈正相關(guān)。隨著碘濃度的升高,碘對細(xì)胞生長的抑制作用與碘濃度呈正相關(guān)。
2.MTT測定細(xì)胞活性
將細(xì)胞置于不同濃度碘培養(yǎng)液中分別培養(yǎng)12、24、48小時。細(xì)胞培養(yǎng)12h后,加碘組與對照組相比,碘濃度為2250mg/L時,細(xì)胞生長正常(P>0.05),當(dāng)?shù)獾臐舛仍?750mg/L以上時,碘濃度為時可以明顯抑制細(xì)胞生長(P<0.01
6、),抑制作用與碘濃度呈正相關(guān)關(guān)系;細(xì)胞培養(yǎng)24小時后,加碘組與對照組相比,碘濃度為1500mg/L時,細(xì)胞生長正常(P>0.05)。碘濃度為3000mg/L時可以明顯抑制細(xì)胞的生長(P<0.01),抑制作用與碘濃度呈正相關(guān)關(guān)系;細(xì)胞培養(yǎng)48小時后,加碘組與對照組相比,碘濃度為600mg/L時,細(xì)胞的生長正常(P>0.05)。碘濃度為1500mg/L時可以明顯抑制細(xì)胞活性(P<0.01),且抑制作用與碘濃度呈正相關(guān)關(guān)系。
3
7、.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
3.1.瑞士-吉姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)
與對照組比較,碘濃度為1500mg/L及以下時,細(xì)胞形態(tài)正常,無明顯變化,從3750mg/L開始加碘組的細(xì)胞數(shù)量隨濃度增大而減少,平滑肌細(xì)胞收縮變形,細(xì)胞間隙增大。隨著濃度的升高,細(xì)胞膜損傷,細(xì)胞核固縮,細(xì)胞呈星形及多邊型,出現(xiàn)“裸核”,甚至可見網(wǎng)狀的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。
3.2.吖啶橙細(xì)胞染色觀察細(xì)胞形態(tài)
與對照組比較,碘濃度為15
8、00mg/L及以下時,細(xì)胞沒有明顯變化,細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。但是當(dāng)?shù)鉂舛仍龃蟮?750mg/L以上時,細(xì)胞形態(tài)逐漸不規(guī)則,細(xì)胞膜損傷,細(xì)胞質(zhì)減少;細(xì)胞質(zhì)致密化,與周圍細(xì)胞聯(lián)系中斷;細(xì)胞核變形明顯,聚集在細(xì)胞邊緣。隨著碘濃度的升高,熒光碎片逐漸增多,在高濃度時可見凋亡小體。
4.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率
細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同濃度碘培養(yǎng)細(xì)胞48h后,與對照組相比,碘濃度為750mg/L時,細(xì)胞生存率明顯降低(P<0.0
9、1);隨著碘濃度的升高,細(xì)胞生存率逐漸降低;碘濃度為750mg/L時,細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.01),隨著碘濃度的升高,細(xì)胞凋亡率逐漸升高。
5.碘對A7r5細(xì)胞中baxmRNA和bcl-2mRNA的表達(dá)的影響
細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同濃度碘培養(yǎng)細(xì)胞48h后,碘濃度為750mg/L時,與對照組相比,baxmRNA和bcl-2mRNA表達(dá)變化,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);碘濃度為1500mg/L開始,bc
10、l-2mRNA表達(dá)逐漸減弱,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);baxmRNA表達(dá)逐漸增強(qiáng),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)
6.碘對A7r5細(xì)胞內(nèi)ASK-1和TRX-1蛋白的表達(dá)的影響
細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同濃度碘培養(yǎng)細(xì)胞48h后,碘濃度為750mg/L時,與對照組相比,細(xì)胞的ASK-1和TRX-1蛋白表達(dá)水平均有顯著變化(P<0.01)。隨著碘濃度的升高,ASK-1蛋白表達(dá)逐漸減弱,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.
11、01);TRX-1蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
結(jié)論:
1、一定濃度的碘對大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞的生長具有一定的抑制作用,細(xì)胞活性降低,且呈時間-劑量關(guān)系;
2、高濃度的碘可以使大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生改變,并且可以導(dǎo)致細(xì)胞凋亡;
3、高濃度的碘可以導(dǎo)致大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞凋亡率升高,促進(jìn)細(xì)胞凋亡;
4、高濃度的碘不僅能夠增強(qiáng)促凋亡m
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 高碘對體外培養(yǎng)大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的研究.pdf
- 大鼠胸主動脈球囊損傷后早期平滑肌細(xì)胞凋亡觀察
- 大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定
- 軟脈靈對大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞遷移的影響.pdf
- 苦碟子總黃酮對大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞增殖和膠原合成的影響.pdf
- SPT對離體大鼠胸主動脈環(huán)和血管平滑肌細(xì)胞電流的影響.pdf
- BRM調(diào)控動脈平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化在胸主動脈夾層及胸主動脈瘤形成中的作用.pdf
- 落新婦甙對大鼠移植主動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響.pdf
- 白藜蘆醇對高糖培養(yǎng)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞P27kip1表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf
- 蝙蝠葛堿對大鼠胸主動脈內(nèi)膜損傷后血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 粟米草甾體皂甙對體外SD大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞增殖、遷移以及膠原蛋白合成的影響.pdf
- kca3.1在堿性環(huán)境促進(jìn)高磷誘導(dǎo)大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞鈣化的機(jī)制研究
- 大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)PARP-1在VDR轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中作用的研究.pdf
- PDGF-BB誘導(dǎo)大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞遷移機(jī)制的研究.pdf
- 血管鈉肽對大鼠腹主動脈平滑肌細(xì)胞ATP敏感鉀通道的作用.pdf
- 奧美沙坦抑制高糖誘導(dǎo)大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的作用研究.pdf
- 雙環(huán)鉑對人主動脈平滑肌細(xì)胞和人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 幾種藥物對肺主動脈平滑肌細(xì)胞增殖作用影響的比較研究.pdf
- 白藜蘆醇對高糖培養(yǎng)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞MCP-1、VCAM-1表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf
- 益肺活血顆粒對體外低氧培養(yǎng)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖相關(guān)機(jī)制的研究.pdf
評論
0/150
提交評論