人參皂甙Rg3對MCF-7細(xì)胞Cx26基因表達(dá)及細(xì)胞間隙連接通訊功能的影響.pdf

1、目的：研究人參皂甙Rg3對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖抑制作用，連接蛋白基因(Connexin26，Cx26)的表達(dá)及對細(xì)胞間隙連接通訊(Gapi unction intercellular tommunication，GJIC)功能的影響，從而探討人參皂甙Rg3抑制腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移潛能的可能機(jī)制，為臨床腫瘤輔助治療中應(yīng)用人參皂甙Rg3提供理論依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，采用四甲基四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)

2、法檢測人參皂甙Rg3對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖活力的影響；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測人參皂甙Rg3作用后Cx26表達(dá)情況；通過劃痕標(biāo)記熒光傳輸實(shí)驗(yàn)檢測GJIC功能的恢復(fù)情況。 結(jié)果：1.不同濃度的人參皂甙Rg3作用一定時(shí)間后，對MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用：人參皂甙Rg3在濃度為10Iμg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml分別作用于人乳腺癌細(xì)胞株MCF-

3、7。24h后抑制率分別為3.1﹪、5.2﹪、16.0﹪、26.3﹪、29.1﹪、50.4﹪。Rg3處理組與空白對照組比較，濃度為40μg/ml以上均明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖(P<0.05)；48h后抑制率分別為6.0﹪、12.4﹪、30.3﹪、60.6﹪、69.1﹪、74.0﹪，20μg/ml以上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。作用時(shí)間上比較，24h和48h人參皂甙Rg3對腫瘤細(xì)胞的抑制率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(．P=0.051)。形態(tài)學(xué)分析，在倒置

4、顯微鏡下可見，經(jīng)藥物作用后MCF-7細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞形態(tài)由原來的貼壁良好、飽滿、多角形、梭形變?yōu)轭悎A形、懸浮、顏色變暗、無折光性，且隨藥物濃度的增加細(xì)胞形態(tài)變化越大。2RT-PCR檢測Rg3對基因Cx26的表達(dá)水平：各實(shí)驗(yàn)組和空白對照組分別作用MCF-7細(xì)胞24h后，提取各組細(xì)胞mRNA，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)。在凝膠成像系統(tǒng)下觀察：對照組和藥物組均有Cx26基因、內(nèi)參基因GAPDH的表達(dá)，經(jīng)Lab-work軟件分析對照組Cx26表達(dá)較藥

5、物組弱，在藥物組隨濃度增加(40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)Cx26表達(dá)增強(qiáng)。方差分析：對照組與藥物組濃度為40μg/ml、80μg/ml相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；與濃度160μg/ml相比有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.01)。藥物組各個(gè)濃度之間比較：濃度160μg/ml分別與濃度40μg/ml、80μg/ml相比，均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，但是40μg/ml與80μg/ml這兩個(gè)濃度組相比無顯著差

6、異(P>0.05)。3．劃痕標(biāo)記熒光傳輸實(shí)驗(yàn) Lucifer Yellow劃痕標(biāo)記熒光傳輸實(shí)驗(yàn)顯示，對照組培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞，Lucifer Yellow熒光染色僅限于單個(gè)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組經(jīng)Rg3處理后Lucifer Yellow熒光通過細(xì)胞間隙連接傳輸至相鄰細(xì)胞，形成片狀熒光染色，人參皂甙Rg3作用后，腫瘤細(xì)胞的間隙連接通訊功能有所恢復(fù)。結(jié)論：1．人參皂甙Rg3對MCF-7腫瘤細(xì)胞有一定的抑制作用，并且隨藥物濃度的增加，對腫瘤細(xì)胞的增殖