苦參堿微乳的研究.pdf

1、研究各組分及其比例對(duì)微乳形成的影響，篩選出藥用微乳的處方，用于制備苦參堿微乳。分別選用Cremophor CO40、Cremophor EL-35、硬脂酸單甘酯作為表面活性劑，無(wú)水乙醇、1，2-丙二醇、正丁醇作為助表面活性劑，IPM、GTCC、橄欖油和麥芽油作為油相，在室溫下制備微乳，繪制(擬)三元相圖，根據(jù)相圖中微乳區(qū)的大小、微乳的穩(wěn)定性以及對(duì)藥物的溶解性，從中篩選出苦參堿微乳的最佳處方。研究發(fā)現(xiàn)，不管助表面活性劑是否存在，Cremo

2、phor CO40、Cremophor EL-35可以和四種油相形成透明微乳，但硬脂酸單甘酯不能形成微乳；當(dāng)助表面活性劑存在時(shí)，微乳形成區(qū)會(huì)變大，但其穩(wěn)定性會(huì)下降；Crcmophor C040/IPM/蒸餾水微乳區(qū)較大，并且較穩(wěn)定，苦參堿微乳處方為：苦參堿1.98g，Cremorphor CO40 4.80g，IPM 1.20g，蒸餾水10.00 g。 考察苦參堿微乳的質(zhì)量和安全性。透射電子顯微鏡觀察苦參堿微乳液滴的形態(tài)，納米粒

3、度儀測(cè)其粒徑大小及其分布，紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定苦參堿微乳中苦參堿含量，并通過(guò)離心、留樣和光照考察其穩(wěn)定性，以家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物考察其對(duì)皮膚的刺激性。結(jié)果表明，苦參堿微乳是無(wú)色透明的，其液滴呈球狀，平均粒徑為70 nm(空白微乳為65 nm)，多分散指數(shù)為0.038，分散性好；苦參堿微乳和空白微乳在穩(wěn)定性和粒徑大小上沒(méi)有顯著差異，但應(yīng)該低溫避光保存；苦參堿在415nm有最大吸收峰，而空白微乳在此波長(zhǎng)處無(wú)吸收，實(shí)驗(yàn)中以415nm作為測(cè)定波長(zhǎng)

4、，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=0.0466C+0.0876，r=0.9997，平均回收率為99.73％，日內(nèi)和日間的精密度均小于1％，苦參堿微乳中苦參堿的含量為110.12mg/mL；不管是完整皮膚或損傷皮膚，空白微乳和苦參堿微乳對(duì)皮膚的刺激反應(yīng)均值均小于0.5，屬于“無(wú)刺激性”。 以苦參堿水溶液作為對(duì)照，用透皮擴(kuò)散儀和離體大鼠腹部皮膚進(jìn)行體外透皮，研究苦參堿微乳的體外經(jīng)皮滲透能力，并考察不同氮酮濃度對(duì)苦參堿微乳透皮性的影響。結(jié)果表明

5、，苦參堿微乳的透皮能力要優(yōu)于苦參堿水溶液的，兩者的透皮速率分別為21.427μg/(cm<'2>·h)和16.332μg/(cm<'2>·h)，12h的體外累積滲透量分別為230.23μg/cm<'2>和160.98μg/cm<'2>，并且苦參堿微乳透皮時(shí)滯相對(duì)小于苦參堿水溶液的；1％～5％氮酮對(duì)苦參堿微乳透皮性都有一定的促滲作用，其中5％的氮酮的促滲作用最強(qiáng)，12h內(nèi)它的透皮累積量為428.17μg/cm<'2>，透皮速率為39.54

6、8μg/(cm<'2>·h)，其中透皮速率分別是苦參堿水溶液和無(wú)氮酮苦參堿微乳的1.85和2.42倍，并且時(shí)滯相對(duì)較小，故優(yōu)選5％氮酮作為苦參堿微乳的透皮促滲劑。 以B16黑素瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞，觀察不同濃度的苦參堿微乳對(duì)其增殖活性影響。采用MTT比色法測(cè)定苦參堿微乳體外對(duì)黑素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。MTT檢測(cè)結(jié)果表明，苦參堿微乳對(duì)小鼠B16黑素瘤細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用。當(dāng)藥物濃度為5～10μg/

7、mL時(shí)，苦參堿微乳組和苦參堿溶液組的增殖抑制作用在統(tǒng)計(jì)上無(wú)顯著差異(P>0.05)，但前者的抑制率大于后者的；濃度為50～800μg/mL時(shí)，苦參堿微乳組的抑制作用明顯大于苦參堿溶液組(P<0.05)；苦參堿微乳作用48h，貼壁細(xì)胞數(shù)量明顯減少，許多細(xì)胞變圓變小，甚至表面出現(xiàn)大空泡樣結(jié)構(gòu)，細(xì)胞培養(yǎng)液中有大量的碎片；空白微乳對(duì)細(xì)胞的抑制作用都比較弱，最大抑制率為13.34％，按6級(jí)毒性分級(jí)法評(píng)價(jià)其對(duì)細(xì)胞的毒性為1級(jí)，達(dá)到合格要求；在空白微