預(yù)處理、后處理和Ang-（1-7）對(duì)肥厚心肌缺血-再灌注損傷的影響.pdf

1、缺血性心臟病是威脅人類健康的主要心血管疾病，而心肌梗死又常常是其嚴(yán)重的、致命性的結(jié)局。溶栓藥物的不斷開(kāi)發(fā)、心血管介入技術(shù)以及冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)的長(zhǎng)足進(jìn)步為心肌梗死的再灌注治療提供了多種有效的方法，降低了心肌梗死的死亡率，改善了病人的預(yù)后。然而，在再灌注治療的過(guò)程中，再灌注本身也會(huì)帶來(lái)心肌損傷，即再灌注損傷。這也是制約接受再灌注治療的心肌梗死病人預(yù)后進(jìn)一步改善的重要因素。因此，如何防治心肌缺血/再灌注損傷至今仍是心血管研究領(lǐng)域的重要課題。

2、 缺血預(yù)處理(preconditioning)由Murry及其同事于1986年首先提出，是一種對(duì)抗缺血、缺血/再灌注損傷的內(nèi)源性保護(hù)形式，可以降低心臟缺血、缺血/再灌注心律失常的發(fā)生率和嚴(yán)重程度，減少缺血/再灌注所致心肌細(xì)胞凋亡，減小心肌梗死的面積，促進(jìn)心臟功能的恢復(fù)。缺血后處理(postconditioning)是近年來(lái)才提出的另外一種內(nèi)源性心臟保護(hù)形式，是指在心臟較長(zhǎng)時(shí)間缺血后再灌注時(shí)，首先給予心臟數(shù)次短時(shí)間的再灌注/缺血循

3、環(huán)，然后才給予心臟充分的再灌注。目前研究顯示，缺血后處理與缺血預(yù)處理對(duì)心肌缺血/再灌注具有相似的保護(hù)作用。 盡管缺血預(yù)處理、缺血后處理對(duì)于正常心臟的缺血/再灌注損傷具有較強(qiáng)的保護(hù)作用。然而，缺血預(yù)處理、缺血后處理的保護(hù)機(jī)制與Ang-(1-7)的保護(hù)機(jī)制顯然不盡相同。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑或血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑能夠增強(qiáng)缺血預(yù)處理的心肌保護(hù)作用或降低缺血預(yù)處理保護(hù)作用產(chǎn)生的閾值。缺血預(yù)處理或缺血后處理與Ang-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用是

4、否會(huì)產(chǎn)生相加或協(xié)同效應(yīng)?這一問(wèn)題也值得研究。 我們通過(guò)制作大鼠腹主動(dòng)脈縮窄致心肌肥厚模型，并在此基礎(chǔ)上利用Langendorff裝置建立心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷模型，分別給予缺血預(yù)處理、缺血后處理、Ang-(1-7)單獨(dú)或聯(lián)合處理，探討缺血預(yù)處理、缺血后處理和Ang-(1-7)對(duì)肥厚心肌缺血/再灌注損傷的影響及其相關(guān)機(jī)制，同時(shí)探討缺血預(yù)處理或缺血后處理與Ang-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)肥厚心肌缺血/再灌注損傷的影響。

5、 本研究包括四個(gè)部分：第一部分：缺血預(yù)處理對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路的作用。 第二部分：缺血后處理對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路的作用。 第三部分：血管緊張素-(1-7)對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及其機(jī)制。 第四部分：缺血預(yù)處理或缺血后處理與血管緊張素-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)肥厚心肌

6、缺血/再灌注損傷的影響。 第一部分缺血預(yù)處理對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路的作用目的探討缺血預(yù)處理對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路的作用。 方法通過(guò)手術(shù)縮窄腹主動(dòng)脈，制作大鼠心肌肥厚模型，然后利用Langendorff裝置進(jìn)行心肌肥厚大鼠離體心臟缺血30min/再灌注60min。 結(jié)果缺血/再灌注30min后

7、，各組離體心臟CF、HR、LVSP均有明顯降低(P＜0.01)，LDH、CK的釋放明顯增多(P＜0.01)。與缺血/再灌注對(duì)照組相比，缺血預(yù)處理組心臟CF、LVSP、HR均有顯著提高(P＜0.01)，CK、LDH釋放減少(P＜0.01)，心肌梗死范圍減小(44.2％±1.1％vs21.5％±1.1％，P＜0.01)，心肌Akt、GSK-3β磷酸化水平增高(P＜0.01，P＜0.05)。Wortmannin能夠抑制缺血預(yù)處理所致的Akt、

8、GSK-3β磷酸化，但只能部分消除缺血預(yù)處理的心臟保護(hù)效應(yīng)。 結(jié)論缺血預(yù)處理能夠減輕心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷，PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路參與介導(dǎo)缺血預(yù)處理對(duì)離體缺血/再灌注心肌肥厚大鼠心臟的保護(hù)作用。 第二部分缺血后處理對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路的作用目的探討缺血后處理對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及PI3K/Akt/GSK-

9、3β信號(hào)通路的作用。 方法通過(guò)手術(shù)縮窄腹主動(dòng)脈，制作大鼠心肌肥厚模型，然后利用Langendorff裝置進(jìn)行心肌肥厚大鼠離體心臟缺血30min/再灌注60min。觀察離體缺血/再灌注心臟LVSP、HR、CF的變化和CK、LDH的釋放，并在離體心臟灌流結(jié)束時(shí)用TTC染色法測(cè)定心肌梗死范圍，利用Western-blot技術(shù)檢測(cè)心肌Akt、GSK-3β的蛋白表達(dá)和磷酸化狀態(tài)。 結(jié)果與缺血/再灌注對(duì)照組相比，缺血后處理組心臟LV

10、SP、CF、HR顯著提高(P＜0.01)，冠脈循環(huán)流出液中CK、LDH釋放減少(P＜0.01)，心肌梗死范圍減小(45.2％±1.1％vs22.3％±0.9％，P＜0.01)，心肌組織中磷酸化Akt(Ser473)、磷酸化GSK-3β(Ser9)水平增高(P＜0.01)，PI3K抑制劑Wortmannin能夠抑制缺血后處理所致的磷酸化Akt(Ser473)、磷酸化GSK-3β(Ser9)水平升高，但只能部分消除缺血后處理的心臟保護(hù)效應(yīng)。

11、 結(jié)論缺血后處理能夠減輕心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷，PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路參與介導(dǎo)缺血后處理對(duì)離體缺血/再灌注心肌肥厚大鼠心臟的保護(hù)作用。 第三部分血管緊張素-(1-7)對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及其機(jī)制目的 探討血管緊張素-(1-7)對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響及其機(jī)制 方法通過(guò)手術(shù)縮窄腹主動(dòng)脈，制作大鼠心肌肥厚模型，然后利用Langendor

12、ff裝置進(jìn)行心肌肥厚大鼠離體心臟缺血30min/再灌注60min。、Mas受體拮抗劑A779處理對(duì)照組(A779)、緩激肽B2受體拮抗劑Hoe140處理對(duì)照組(Hoe)。觀察離體缺血/再灌注心臟LVSP、HR、CF的變化和CK、LDH的釋放，并在離體心臟灌流結(jié)束時(shí)用TTC染色法測(cè)定心肌梗死范圍。 結(jié)果與缺血/再灌注對(duì)照組相比，血管緊張素-(1-7)處理組心臟LVSP、CF顯著提高(P＜0.01)，冠脈循環(huán)流出液中CK、LDH釋放

13、減少(P＜0.01)，心肌梗死范圍減小(46.2％±2.7％vs28.3±1.4％，P＜0.01)。血管緊張素-(1-7)受體拮抗劑A779、緩激肽B2受體拮抗劑Hoe140能夠消除血管緊張素-(1-7)的這種心臟保護(hù)作用。 結(jié)論血管緊張素-(1-7)能夠減輕心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷，其作用通過(guò)其特異性受體介導(dǎo)，并與緩激肽的作用密切相關(guān)。 第四部分缺血預(yù)處理或缺血后處理與血管緊張素-(1-7)合用對(duì)心肌肥厚大

14、鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響目的探討缺血預(yù)處理或缺血后處理與血管緊張素-(1-7)合用對(duì)心肌肥厚大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷的影響 方法通過(guò)手術(shù)縮窄腹主動(dòng)脈，制作大鼠心肌肥厚模型，然后利用Langendorff裝置進(jìn)行心肌肥厚大鼠離體心臟缺血30min/再灌注60min。觀察離體缺血/再灌注心臟LVSP、HR、CF的變化和CK、LDH的釋放，并在離體心臟灌流結(jié)束時(shí)用TTC染色法測(cè)定心肌梗死范圍。 結(jié)果與缺血/再灌注對(duì)

15、照組比較，血管緊張素-(1-7)組、缺血預(yù)處理組、缺血后處理組離體心臟的CF、HR、LVSP顯著提高(P＜0.01)，LDH、CK的釋放減少，心肌梗死范圍減小(45.6％±1.2％vs27.4％±1.3％，24.3％±0.8％，25.7％±1.1％，P＜0.01)。缺血預(yù)處理或缺血后處理與血管緊張素-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用，有進(jìn)一步促進(jìn)CF恢復(fù)的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。缺血預(yù)處理與血管緊張素-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用略使離體心臟左室

16、收縮壓進(jìn)一步升高，有進(jìn)一步促進(jìn)離體心臟收縮功能恢復(fù)的趨勢(shì)(P＜0.05)。缺血后處理與血管緊張素-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用有進(jìn)一步改善離體心臟收縮功能的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。缺血預(yù)處理與血管緊張素-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用使CK的釋放進(jìn)一步減少(P＜0.01)，缺血后處理與血管緊張素-(1-7)聯(lián)合應(yīng)用使LDH、CK的釋放都進(jìn)一步減少(P＜0.05，P＜0.01)。與缺血預(yù)處理組或缺血后處理組相比，缺血預(yù)處理或缺血后處理與血管緊張素