性病病原體低密度基因芯片的初步研制.pdf

1、目的 采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)結(jié)合反向雜交技術(shù)研制性病病原體低密度基因芯片.方法 將淋病奈瑟菌、解脲脲原體、沙眼衣原體、白色念珠菌以及人類(lèi)免疫缺陷病毒-1(HIV-1)SF2株env基因的種特異性探針加尾后固定在尼龍膜上.將上述5種性病病原體的標(biāo)準(zhǔn)菌株提取DNA后采用細(xì)菌、真菌以及人類(lèi)免疫缺陷病毒三組通用引物分別行PCR擴(kuò)增,在擴(kuò)增過(guò)程中用Bio-16-dUTP標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物,將上述擴(kuò)增產(chǎn)物變性后分別與點(diǎn)有5種探針的尼龍膜反向雜交;將來(lái)

2、源于臨床的性病病原體標(biāo)本提取DNA后與上述三組通用引物在一個(gè)PCR反應(yīng)體系內(nèi)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增過(guò)程中用Bio-16-dUTP標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物,擴(kuò)增產(chǎn)物變性后與點(diǎn)有5種探針的尼龍膜反向雜交.結(jié)果 對(duì)淋病奈瑟菌、解脲脲原體、沙眼衣原體的標(biāo)準(zhǔn)菌株行PCR擴(kuò)增,均出現(xiàn)520bp長(zhǎng)度的DNA片段,對(duì)白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株行PCR擴(kuò)增出現(xiàn)350bp的條帶,對(duì)HIV-1SF2株env基因行PCR擴(kuò)增出現(xiàn)167bp長(zhǎng)度的DNA片段,敏感性試驗(yàn)可檢出20fg的菌