BDNF基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表達(dá)及對(duì)豚鼠螺旋神經(jīng)元保護(hù)作用.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文BDNF基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表達(dá)及對(duì)豚鼠螺旋神經(jīng)元保護(hù)作用姓名：陳觀貴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：謝鼎華20090401博士學(xué)位論文中文摘要第二章BDNF基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞正常豚鼠內(nèi)耳移植的實(shí)驗(yàn)研究目的BDNF基因修飾MSCs(B科師MSCs)是治療神經(jīng)退變性疾病包括感音神經(jīng)性聾的潛在有效方法，但首先要明確以下三個(gè)問題：一是手術(shù)及細(xì)胞移植對(duì)耳蝸功能及結(jié)構(gòu)是否造成不良影響；二是基因修飾的M

2、SCs在耳蝸內(nèi)存活和分布情況如何；最后是移植細(xì)胞在耳蝸內(nèi)是否能較長時(shí)間維持表達(dá)目的基因的能力。目前還沒有轉(zhuǎn)基因MSCs內(nèi)耳移植的報(bào)道，在此部分我們將在正常豚鼠耳蝸中對(duì)這些問題進(jìn)行初步的探討。方法正常豚鼠分3組，組I：為空白對(duì)照組，組II：經(jīng)鼓階開窗注射MSCs，組III：經(jīng)鼓階開窗注射BDNFMSCs。移植細(xì)胞均經(jīng)DAPI熒光標(biāo)記。3個(gè)組的動(dòng)物均在術(shù)前1d、術(shù)后7d及術(shù)后28d分別行ABR檢測，比較各組術(shù)前、術(shù)后的ABR閾值變化；分別取

3、術(shù)后7d及28d各組動(dòng)物的耳蝸石蠟切片HE染色觀察耳蝸結(jié)構(gòu)；熒光顯微鏡觀察移植細(xì)胞存活及分布；免疫組化方法檢測BDNF在耳蝸內(nèi)的表達(dá)情況。結(jié)果經(jīng)鼓階開窗移植細(xì)胞導(dǎo)致術(shù)后7d時(shí)ABR閾值的暫時(shí)性提高，術(shù)后28d后恢復(fù)至正常水平。耳蝸石蠟切片HE染色顯示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物耳蝸內(nèi)結(jié)構(gòu)無明顯異常改變。組II和組III術(shù)后7d耳蝸切片可見熒光信號(hào)多分布于耳蝸底周的外淋巴腔(鼓階和前庭階)，極少量細(xì)胞能遷移到中階及蝸軸，術(shù)后28d移植細(xì)胞存活數(shù)量有所下降，但

4、兩組動(dòng)物的移植細(xì)胞存活時(shí)間均超過28d，并且BDNF基因修飾MSCs能提高移植細(xì)胞術(shù)后28d時(shí)的存活率。免疫組化顯示組III部分移植細(xì)胞表達(dá)BDNF，術(shù)后28d的陽性表達(dá)率比術(shù)后7d有顯著性下降，而其余兩組無陽性染色。結(jié)論經(jīng)鼓階開窗移植MSCs對(duì)聽力的損害是輕微(10dBSPL)和暫時(shí)的(28d)。移植后光鏡下耳蝸形態(tài)結(jié)構(gòu)沒有明顯變化。移植細(xì)胞能存活并分布于耳蝸內(nèi)各周，主要在耳蝸底周的外淋巴腔，BDNF基因轉(zhuǎn)染MSCs后可以提高移植細(xì)胞