小麥藍(lán)矮病病原的鑒定分類(lèi)及其寄主范圍的研究.pdf

1、小麥藍(lán)矮病(Wheatbluedwarf，WBD)是我國(guó)首次報(bào)道的小麥植原體病害，由介體條沙葉蟬(PsammotettixstriatusL.)專(zhuān)化性傳播，國(guó)外尚未見(jiàn)報(bào)道。該病害主要發(fā)生在西北干旱、半干旱地區(qū)的晚熟冬麥區(qū)，在陜西曾先后大發(fā)生過(guò)10余次，發(fā)病田塊輕者減產(chǎn)20％-30％，重者絕收翻種，對(duì)小麥高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)，造成嚴(yán)重威脅。由于植原體不能進(jìn)行人工培養(yǎng)，僅通過(guò)葉蟬傳播，加之植原體在病株體內(nèi)含量低等原因，致使對(duì)小麥藍(lán)矮病的研究非常有限。

2、目前對(duì)該病病原分類(lèi)地位的研究尚未見(jiàn)系統(tǒng)的報(bào)道，對(duì)該病初侵染源、越冬越夏寄主及寄主范圍等方面的認(rèn)識(shí)也很有限，因此，本文就此方面對(duì)小麥藍(lán)矮病進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。分析研究結(jié)果如下： 對(duì)小麥藍(lán)矮病的發(fā)生情況進(jìn)行了田間調(diào)查，結(jié)果表明：該病在我國(guó)陜西、甘肅等許多地方危害十分嚴(yán)重，給小麥糧食生產(chǎn)造成嚴(yán)重的損失，發(fā)現(xiàn)小麥藍(lán)矮病的發(fā)生與毒源、小麥品種、栽培方式、傳播介體的蟲(chóng)口密度及麥田管理水平都有密切關(guān)系，其中充足的毒源、易感小麥品種和介體條沙葉

3、蟬的數(shù)量是該病發(fā)生的關(guān)鍵因素。通過(guò)傳毒接種試驗(yàn)和電鏡超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察確定了小麥藍(lán)矮病的病原是植原體，傳播介體是條沙葉蟬。首次對(duì)條沙葉蟬的卵進(jìn)行了超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察，其內(nèi)未見(jiàn)到植原體，證明小麥藍(lán)矮病植原體不經(jīng)卵傳。 在分子水平采用PCR技術(shù)首次對(duì)小麥藍(lán)矮病植原體16SrDNA基因片段和tuf基因進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，并將所測(cè)序列與已知的植原體16Sr各組中代表性的植原體序列進(jìn)行同源性比較，確定了其分類(lèi)地位。采用引物對(duì)R16mF2/R16mR1擴(kuò)增

4、的16SrDNA基因片段共含有1452個(gè)核苷酸，經(jīng)同源性分析可知小麥藍(lán)矮病植原體與三葉草綠變植原體的親緣關(guān)系最近，初步判定其屬于16SrI-C亞組。擴(kuò)增的tuf基因片段長(zhǎng)為842bp，共編碼280個(gè)氨基酸，同源性比較分析的結(jié)果是小麥藍(lán)矮病植原體與三葉草綠變植原體KVF株系的同源性最高，核苷酸的同源性達(dá)99.9％，從而證實(shí)了小麥藍(lán)矮病植原體實(shí)屬于16SrI-C亞組，首次利用分子方法在亞組和種的水平上確定了小麥藍(lán)矮病植原體的分類(lèi)地位。16S

5、rDNA和tuf基因的序列均已提交GenBank，16SrDNA序列登錄號(hào)為DQ078304、tuf基因的登錄號(hào)為DQ507200。 本實(shí)驗(yàn)對(duì)小麥藍(lán)矮病發(fā)病初期、發(fā)病盛期、收割麥子后休閑期和小麥秋播之前的田間地頭雜草和自生麥苗進(jìn)行了系統(tǒng)的調(diào)查和采樣，應(yīng)用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了分子檢測(cè)，并對(duì)感病雜草巢式擴(kuò)增(nested-PCR)產(chǎn)物進(jìn)行了RFLP分析，同時(shí)結(jié)合室內(nèi)蟲(chóng)媒接種試驗(yàn)，共鑒定出大田自然寄主和室內(nèi)蟲(chóng)媒接種寄主18種，涉及菊科

6、、夾竹桃科、茄科、豆科、禾本科、十字花科、玄參科、紫草科和莧科9科18個(gè)屬，說(shuō)明小麥藍(lán)矮病植原體(WBD)具有廣泛的寄主范圍。 通過(guò)對(duì)小麥藍(lán)矮病大田自然寄主的研究可知：自生麥、反枝莧、大畫(huà)眉草和三葉草(白車(chē)軸草)、婆婆納和米米蒿等雜草是小麥藍(lán)矮病植原體重要的越夏寄主和過(guò)渡寄主，初步確定是小麥藍(lán)矮病的初侵染源，麥?zhǔn)蘸?6月下旬以后)至下一季小麥播種前(9月下旬)是其侵染循環(huán)的關(guān)鍵，為進(jìn)一步研究小麥藍(lán)矮病植原體的循環(huán)規(guī)律和制定防治原