喉鱗狀細(xì)胞癌中EphB4基因突變與表達(dá)的研究.pdf

1、喉鱗狀細(xì)胞癌(Laryngeal Squamous Cell Carcinoma，LSCC，喉癌)是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，是僅次于肺癌第二位的呼吸道高發(fā)腫瘤。在我國(guó)，東北地區(qū)是喉癌的高發(fā)區(qū)域，過(guò)去的10年中，我國(guó)喉癌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。喉癌對(duì)放療及化療均不敏感，手術(shù)是目前主要的治療手段，但手術(shù)具有不小的損傷性，術(shù)后患者的生存率和生活質(zhì)量均不理想。因此實(shí)現(xiàn)對(duì)喉癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，并在基因水平尋找新的治療手段成為當(dāng)前急需解決的問(wèn)

2、題。 惡性腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移是多基因、多因子共同作用的結(jié)果，涉及到多種癌基因的激活和抑癌基因的失活。腫瘤的發(fā)生及發(fā)展還與血管的形成有著密切的聯(lián)系，目前已知有多種血管生成因子參與腫瘤血管形成。最近的一系列報(bào)道顯示，產(chǎn)促紅細(xì)胞生成素的肝細(xì)胞受體(Erythropoietin Producing Hepatocelluar receptor,Eph)在腫瘤血管的生成中起著關(guān)鍵性的作用。Eph作為酪氨酸激酶受體家族中最大的一個(gè)亞家族，目前

3、已確認(rèn)的Eph家族成員共14個(gè)，根據(jù)結(jié)構(gòu)同源性和結(jié)合特性分為A、B兩個(gè)亞型，Eph的14個(gè)成員中，EphB4及其配體EphrinB2在腫瘤發(fā)生和演進(jìn)中的作用已受到廣泛的關(guān)注。 材料與方法： 1.實(shí)驗(yàn)材料：40例標(biāo)本來(lái)源于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科患者手術(shù)切取標(biāo)本。病理結(jié)果證實(shí)均為喉鱗狀細(xì)胞癌，術(shù)前未經(jīng)化療和放療。 2.實(shí)驗(yàn)方法：RT-PCR方法以癌旁組織為參照分析喉癌組織中EphB4基因mRNA的表達(dá)情況，

4、Western blot方法分析EphB4蛋白質(zhì)在喉癌組織中的表達(dá)情況，使用半定量PCR的方法檢測(cè)腫瘤組織中該基因的擴(kuò)增情況，PCR-LIS-SSCP技術(shù)結(jié)合DNA測(cè)序篩查了EphB4基因第13、14外顯子(此區(qū)域編碼蛋白質(zhì)的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域)的突變情況。 結(jié)果： 1.RT-PCR結(jié)果表明，40例配對(duì)標(biāo)本，所有的癌組織中均有EphB4基因的表達(dá)，而在癌旁正常組織中僅呈現(xiàn)低表達(dá)或無(wú)表達(dá)。40例癌組織ZphB4基因mRNA表

5、達(dá)/β-actin表達(dá)的平均密度值比值為0.738±0.137，癌旁正常組織為0.450±0.173，40例配對(duì)標(biāo)本中，29例癌組織EphB4基因mRNA表達(dá)高于癌旁正常組織，占72.5％(29/40)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，腫瘤組與對(duì)照組差異顯著(t=7.77，P<0.01)。 2.Western blot結(jié)果表明，40例配對(duì)標(biāo)本，所有的癌組織中均可見EphB4，蛋白質(zhì)的表達(dá)，而在癌旁正常組織中僅呈現(xiàn)低表達(dá)或無(wú)表達(dá),癌組織EphB4蛋

6、白質(zhì)表達(dá)/β-actin表達(dá)的平均密度比值為0.757±0.174，癌旁正常組織EphB4蛋白質(zhì)表達(dá)/β-actin表達(dá)的平均密度值為0.509±0.168，40例配對(duì)標(biāo)本中，25例癌組織EphB4蛋白質(zhì)表達(dá)高于配對(duì)的癌旁正常組織，占62.5％(25/40)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，腫瘤組與對(duì)照組差異顯著(t=5.99，P<0.01)。 3.對(duì)40例樣本的ZPhB4基因13、14號(hào)外顯子突變篩查，僅有兩例出現(xiàn)了泳動(dòng)變位，通過(guò)DNA雙向測(cè)序

7、，未發(fā)現(xiàn)有堿基的改變。 4.PCR結(jié)果顯示，40例腫瘤組織中未發(fā)現(xiàn)EphB4基因的擴(kuò)增。 結(jié)論： 1.已檢測(cè)的40對(duì)樣本中未發(fā)現(xiàn)EphB4的擴(kuò)增。 2.篩查40對(duì)樣本，EphB4基因的13、14號(hào)外顯子中也未發(fā)現(xiàn)突變。 3.喉癌組織中EphB4的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均明顯高于癌旁正常組織，且其高表達(dá)與腫瘤的臨床分期、腫瘤直徑的大小以及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 4.EphB4的mRN