促胰島素分泌肽融合蛋白的初步藥效及同位素示蹤法測定其藥代動力學(xué)的實驗研究.pdf

1、第一部分促胰島素分泌肽融合蛋白對C57BL/6J小鼠的藥效學(xué)研究
　　 目的：研究促胰島素分泌肽融合蛋白(以下簡稱Betalog)對C57BL/6J小鼠的糖耐量、胰島素水平的影響。
　　 材料與方法：①C57BL/6J小鼠32只，隨機均分4組：人血清白蛋白(以下簡稱HSA)組(150μg·kg—1)、Betalog低劑量組(50μg·kg—1)、Betalog中劑量組(150μg·kg—1)、Betalog高劑量組(45

2、0μg·kg—1)，對照組與實驗組于腹腔注藥1h后腹腔注射葡萄糖1.5mg·g—1(體重)，各組分別于注藥前和注射葡萄糖后0，10，20，30，60，90，120min從尾靜脈采血測血糖水平。②另40只C57BL/6J小鼠，隨機均分4組：HSA組(1mg·kg—1)、給Betalog(1mg·kg—1)后1h組、給Betalog后24h組、給Betalog后48h組，以腹腔注射方式進行持久降糖的糖耐量試驗。③另12只C57BL/6J小鼠

3、，分成2組：HSA組(1mg·kg—1)，Betalog組(1mg·kg—1)，注藥1h后腹腔注射葡萄糖1.5mg·g—1(體重)，各組分別于注射葡萄糖后20min和60min從尾靜脈采血100μL做胰島素測定。
　　 結(jié)果：在急性降糖試驗中，HSA組與Betalog中劑量組在注糖后各時間點間血糖值均有差異，Betalog組血糖值低于HSA組。Betalog三種劑量除注糖后20min及30min組間有差異外，余時間點均無差異。在

4、持久降糖試驗中，注糖后10min及其以后各時間點，各處理組間比較有差異。經(jīng)過與HSA組間的兩兩比較顯示：注糖后20min及30min點，Betalog的各組與HSA對照組比皆有差異；在注糖后60min時，注藥后1h組與HSA組比有統(tǒng)計學(xué)差異，余兩組與對照組比無差異；在注糖后90min時，注藥后24h組與HSA對照組比無統(tǒng)計學(xué)差異，余兩組與對照組比皆有差異。HSA組和Betalog中劑量組在20min、60min胰島素水平比較有顯著性差異

5、。
　　 結(jié)論：Betalog能有效控制C57BL/6J小鼠糖負(fù)荷后的血糖水平，不同劑量對血糖水平有所影響。給Betalog后48h仍能對糖負(fù)荷后的血糖水平有所控制。Betalog可明顯提高正常小鼠的胰島素水平。
　　 第二部分促胰島素分泌肽融合蛋白對GK大鼠的藥效學(xué)研究
　　 目的：研究Betalog對GK大鼠的糖耐量、胰島素水平的影響。
　　 材料與方法:12只雄性GK大鼠隨機均分2組，分別腹腔注射人

6、血清白蛋白(HSA)(1mg·kg—1)和Betalog(1mg·kg—1)，在注藥前及注藥后0.5h，2h，4h，8h，12h，24h，48h從尾靜脈采血測血糖水平，同時分別于2h，8h，48h尾靜脈采血100μL行血漿胰島素測定。
　　 結(jié)果：模型鼠HSA組的血糖水平在各時間點均較穩(wěn)定，Betalog組在注藥后血糖呈下降趨勢，在注藥后0.5h，2h，4h與HSA組無差異，而在8h、12h、24h、48h均有顯著性差異(P＜0

7、.01)。兩組胰島素水平在2h無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，8h及48h均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，Betalog組胰島素水平高于HSA組。
　　 結(jié)論：Betalog給藥48h內(nèi)對糖尿病模型鼠的血糖控制及促胰島素分泌有效。
　　 第三部分同位素示蹤法測定促胰島素分泌肽融合蛋白藥代動力學(xué)實驗
　　 目的：研究Betalog在大鼠體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律，闡明該藥吸收、分布、代謝和排泄的過程與特點，提供藥代動力學(xué)參數(shù)

8、，為藥理、毒理研究和臨床合理用藥提供依據(jù)。
　　 方法：①采用同位素標(biāo)記示蹤法結(jié)合三氯醋酸(TCA)沉淀法技術(shù)研究125I—Betalog的藥代動力學(xué)。②用氯胺—T(Ch—T)法對Betalog進行125I標(biāo)記，標(biāo)記物的放射化學(xué)純度測定采用三氯醋酸(TCA)沉淀法。該法用于分離Betalog和它的代謝物。③同位素示蹤法測量三種不同劑量的Betalog在大鼠體內(nèi)的血藥濃度隨時間的變化。大鼠皮下注射劑量分別為150μg·kg—1，3

9、00μg·kg—1和600μg·kg—1。用DAS2.0軟件擬合大鼠的藥物代謝數(shù)學(xué)模型，并計算其藥代動力學(xué)參數(shù)。④125I—Betalog在大鼠體內(nèi)的分布采用放射性示蹤法。⑤收集大鼠不同時間段排出的尿、糞和膽汁，測量它們的放射性，計算不同時間內(nèi)累積排出百分?jǐn)?shù)。
　　 結(jié)果：①125I—Betalog標(biāo)記物的放射化學(xué)純度大于90％，Ch—T法標(biāo)記125I對Betalog的物理化學(xué)性質(zhì)和生物活性無影響。②測量方法準(zhǔn)確度在96％～11

10、2％范圍，各批試驗的TCA沉淀前后的標(biāo)準(zhǔn)曲線呈線性(r＞0.9979)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度覆蓋了樣品測量的范圍，125I—Betalog的TCA沉淀率基本都大于90％，而TCA沉淀方法測定125I—非特異性沉淀率為5.10％±0.58％。③三種不同劑量的125I—Betalog單次皮下注射后在大鼠體內(nèi)的動力學(xué)過程都符合一室模型，三個劑量組的半衰期T1/2為15.2h～16.7h，大鼠皮下高、中、低三組給藥劑量與AUC和Cmax呈線形關(guān)系，相

11、關(guān)系數(shù)都達0.98。皮下給藥2h內(nèi)，血液中以代謝物為主，24h后血液中以原形藥為主。④代謝初期，125I—Betalog在大鼠中主要分布的臟器是腎、甲狀腺、肺等，給藥72h后，除甲狀腺和腎中含量稍高外，其余臟器均很少。此外，藥物在大鼠卵巢有較高水平濃集，應(yīng)關(guān)注其生殖毒性。大鼠腦中放射性水平較低，說明Betalog不能透過大鼠的血腦屏障。⑤大鼠體內(nèi)藥物主要通過尿液排出，144h排出95.0％，而排出物中以體內(nèi)生成的游離放射性125I為主，