番鴨催乳素基因的克隆與序列分析.pdf

1、就巢是影響家禽繁殖性能的主要因素之一，而催乳素是禽類就巢發(fā)生和維持的關(guān)鍵激素。從分子水平上研究催乳素對番鴨就巢的調(diào)控，對番鴨就巢分子機理的研究有重要的指導(dǎo)意義。本試驗從番鴨腦垂體組織快速提取總RNA，根據(jù)國外已發(fā)表的北京鴨催乳素基因設(shè)計引物，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法擴增獲得了特異性片段，將擴增片段與載體連接、克隆、測序后進行序列分析，為利用標(biāo)記輔助選擇或其他選育方法清除種鴨的就巢基因奠定基礎(chǔ)，以加快番鴨的遺傳進展和提

2、高飼養(yǎng)效益。 (1)首次采用RT-PCR技術(shù)擴增、克隆了番鴨催乳素基因，獲得了全長為765bp的cDNA序列(基因登陸號：AM180924)。該序列最大的一個開放閱讀框(ORF)從ATG開始到TAA結(jié)束，共編碼229個氨基酸，分子量為25.8kDa，為進一步研究鴨就巢性及PRL基因的多態(tài)性、表達(dá)與調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。 (2)通過BLAST進行相似性搜索，搜索結(jié)果表明該序列與催乳素的序列同源性最高。采用SignalIP對氨基酸

3、序列進行潛在信號肽剪切位點預(yù)測，該氨基酸序列具有一個潛在信號肽剪切位點，位于第30-31個氨基酸之間，與家禽催乳素前體的信號肽裂解位點具有高度保守性。 (3)與已報道的北京鴨、馬崗鵝、皖西白鵝、萊茵鵝、家雞、火雞、鵪鶉等禽類催乳素基因的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列進行比較，結(jié)果表明，不同品種間核苷酸序列同源性介于91.0％～99％之間，其中番鴨與北京鴨間的同源性最高(99％)，與皖西白鵝、萊茵鵝、馬崗鵝也有很高的同源性，均達(dá)到9

4、8％以上。經(jīng)推導(dǎo)的相應(yīng)氨基酸序列的同源性比較結(jié)果，番鴨與北京鴨氨基酸序列同源性為98.7％；與皖西白鵝、萊茵鵝、馬崗鵝分別為98.7％、98.3％、99.1％，與家雞、火雞、鵪鶉的同源性在91.7％～93.3％之間。同源性分析結(jié)果表明，番鴨與北京鴨親緣關(guān)系最近，其次是鵝品種；與家雞、火雞、鵪鶉也有很高的同源性，說明催乳素基因在進化過程中是相當(dāng)保守的。 (4)番鴨的催乳素氨基酸序列與北京鴨比較兩者并沒有太大差別，僅在第9位(K/E