中藥提取物逆轉(zhuǎn)K562-ADM細(xì)胞的耐藥作用及其機(jī)制的初步探討.pdf

1、山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文中藥提取物逆轉(zhuǎn)K562ADM細(xì)胞的耐藥作用及其機(jī)制的初步探討姓名：?jiǎn)谈呔晟暾?qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師：姜國(guó)勝20090501山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文身的毒副作用外，與血液腫瘤患者耐藥產(chǎn)生并非單一機(jī)制密切相關(guān)。某些中藥本身具有抗癌作用，或可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等協(xié)同化療藥物殺滅腫瘤細(xì)胞，而中藥又具有來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉、毒副作用小等特點(diǎn)，所以近年來(lái)國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者致力于從中藥中尋找高效、低毒

2、、多靶點(diǎn)的逆轉(zhuǎn)劑，并且在中藥單體、復(fù)方及聯(lián)合用藥等方面均取得了一定進(jìn)展。目的本實(shí)驗(yàn)在以上研究背景的基礎(chǔ)上，以人急性紅白血病耐藥細(xì)胞K562／ADM細(xì)胞株為研究對(duì)象，建立阿霉素誘導(dǎo)K562／ADM細(xì)胞耐藥的模型，觀察兩種中藥處理后細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，以及mdr1、T0p0II基因在mRNA水平的表達(dá)變化，觀察兩種中藥提取物黃芩苷、京尼平苷對(duì)多藥耐藥(MDR)K562／ADM細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ADM的濃度，探討其分子機(jī)制。方

3、法’K562厶mM細(xì)胞于37℃、5％C02、飽和濕度條件下培養(yǎng)，定期加入ADM(1ug／m1)以刺激mdr1／PgP持續(xù)高表達(dá)。無(wú)ADM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2周后用于實(shí)驗(yàn)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562／ADM細(xì)胞，分別加入終濃度為10／zg／ml黃芩苷、20／zg／ml京尼平苷共孵育72h后，MTr實(shí)驗(yàn)檢測(cè)化學(xué)藥物敏感性，RTPCR檢測(cè)mdr1、TopoII基因在mRNA水平的表達(dá)變化，流式檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ADM的濃度。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，以RPMl640

4、為空白對(duì)照組。結(jié)果K56秈M細(xì)胞對(duì)黃芩苷、京尼平苷、空白對(duì)照組的Itso值分別為506、674和985聲g／rra，耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為195及146倍。體外作用48h后，02ag／mlADM對(duì)應(yīng)的未加中藥單體組、京尼平苷和黃芩苷的增殖抑制率分別是(66118)％、(4168131)％和(4835226)％。而04#g／miADM對(duì)應(yīng)的未加中藥單體組、京尼平苷和黃芩苷的增殖抑制率分別是(1524286)％、(45236)％和(44。219

5、3)％。半定量分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物光密度相對(duì)表達(dá)量顯示，K562／ADM細(xì)胞分別與50肛g／ml黃芩苷、100#g／ml京尼平苷共同孵育72h后，細(xì)胞內(nèi)mdr1基因表達(dá)逐漸減弱，TopoII基因表達(dá)逐漸增強(qiáng)，Caspase一3基因表達(dá)增強(qiáng)(P001)，流式檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ADM濃度較空白組提高(尸005)。結(jié)論分別經(jīng)中藥單體黃芩苷、京尼平苷處理后，耐藥K562／A02細(xì)胞部分恢復(fù)了對(duì)ADM的敏感性，增殖性受到明顯抑制，結(jié)果表明上述兩種中藥單體可