亞低溫-神經(jīng)干細胞移植修復(fù)腦缺血性神經(jīng)功能障礙的實驗研究.pdf

1、近年來神經(jīng)干細胞方面的研究已成為神經(jīng)科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點，干細胞的體外分離、培養(yǎng)、純化和鑒定技術(shù)已經(jīng)相對成熟，神經(jīng)干細胞替代治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病也逐漸走向臨床應(yīng)用階段，但具體的移植途徑、移植條件及移植時間窗等問題目前尚未形成統(tǒng)一的規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)，本實驗通過對大鼠大腦中動脈缺血模型(MCAO)進行亞低溫條件下神經(jīng)干細胞腦內(nèi)移植，觀察亞低溫條件下移植神經(jīng)干細胞對大鼠缺血性腦卒中的治療作用，探討對腦卒中患者進行細胞移植替代治療在移植途徑、移植條件和移植

2、時間窗等方面的問題，并印證神經(jīng)干細胞替代治療的可行性和可靠性。 目的： 探討大鼠胚胎神經(jīng)干細胞移植治療局灶性腦缺血再灌注損傷的優(yōu)化條件和效率。 方法： 從孕13.5天Sprague-Dawley(SD)大鼠胎鼠的大腦皮層中分離出神經(jīng)干細胞，采用含有bFGF、EGF、N2和B27因子的DMEM/F12聯(lián)合培養(yǎng)基培養(yǎng)、純化出神經(jīng)干細胞，并應(yīng)用免疫熒光法進行鑒定；選用270±20gSD成年大鼠，采取改良Koiz

3、umi線栓法制作大鼠MCAO模型；在誘導(dǎo)大鼠亞低溫條件下，選取第三代、生長旺盛的神經(jīng)干細胞球制成的單細胞懸液對模型大鼠進行腦內(nèi)移植，移植前3天對神經(jīng)干細胞做BrdU標(biāo)記，移植后35天進行行為學(xué)檢測、神經(jīng)功能評分并取腦進行免疫組化分析。 結(jié)果： 從孕13.5天的胎鼠大腦皮層中成功分離出神經(jīng)干細胞，在加入bFGF、EGF、N2和B27因子的DMEM/F12(1：1)體外培養(yǎng)基中能夠穩(wěn)定生長、擴增神經(jīng)干細胞，Nestin熒光染

4、色陽性，分化14天后分別經(jīng)NeuN、GFAP和GalC染色呈陽性結(jié)果，證明培養(yǎng)的細胞為神經(jīng)干細胞；大鼠MCAO模型制作成功后7天，腦大體標(biāo)本可見明顯缺血軟化灶形成且位置恒定，說明模型制作成功；細胞移植35天后，與陰性對照組相比，陽性對照組與亞低溫實驗組神經(jīng)功能評分在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異，移植位點均檢測到BrdU陽性神經(jīng)干細胞，免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)移植的干細胞存在分化并且形成NeuN陽性的神經(jīng)元。 結(jié)論： 應(yīng)用含有bFGF、EG