Lewis y抗原對人卵巢癌細(xì)胞CD147分子表達(dá)及其介導(dǎo)的粘附能力的影響.pdf

1、目的：
　　 證明卵巢癌細(xì)胞中粘附分子CD147及Lewisy抗原的結(jié)構(gòu)關(guān)系,探討Lewisy抗原對細(xì)胞CD147分子表達(dá)及其介導(dǎo)的粘附能力的影響。
　　 方法：
　　 1、利用Real-time PCR方法檢測CD147 mRNA在RMG-I-hFUT和RMG-I細(xì)胞中的表達(dá)。利用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測兩種卵巢癌細(xì)胞系中CD147的表達(dá);采用Western Blot方法檢測Lewisy抗體及PI3K通路特異性抑制

2、劑LY294002處理前后兩種細(xì)胞系中CD147的表達(dá);免疫共沉淀及激光共聚焦方法檢測Lewisy抗原與CD147的結(jié)構(gòu)關(guān)系,并利用免疫共沉淀方法檢測CD147各亞型在胞膜及胞漿的定位;檢測抗Lewisy抗體及抗CD147抗體處理前后RMG-I-hFUT及RMG-I細(xì)胞在層粘連蛋白和Ⅳ型膠原上粘附鋪展能力的變化。
　　 2、為證實CD147在卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)的普遍性,我們同時用免疫細(xì)胞化學(xué)、Real-time PCR、Weste

3、rn Blot及免疫共沉淀方法檢測了六種卵巢癌細(xì)胞中(RMG-I-hFUT\RMG-I、H08910PM\H08910、COC1DDP\COC1)CD147 mRNA、CD147蛋白及其上Lewisy表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫細(xì)胞化學(xué)和Western Blot結(jié)果均顯示RMG-I-hFUT細(xì)胞中CD147的表達(dá)明顯高于RMG-I細(xì)胞(P均＜0.05)?？筁ewisy抗體及LY294002預(yù)先處理RMG-I-hF

4、UT和RMG-I細(xì)胞后,CD147表達(dá)均明顯下降(P均＜0.05)。Lewisy抗原能與CD147分子發(fā)生免疫共沉淀,RMG-I-hFUT細(xì)胞的CDl47分子中Lewisy的含量約為RMG-I細(xì)胞的2.12倍(P＜0.05)。Real-time PCR結(jié)果顯示CD147mRNA在RMG-I-hFUT略中有降低(P＞0.05)。RMG-I-hFUT細(xì)胞在層粘連蛋白和Ⅳ型膠原上的粘附能力均強(qiáng)于RMG-I細(xì)胞(P均＜0.05),這種粘附能力的

5、增強(qiáng)可被抗Lewisy抗體抑制。
　　 2、免疫細(xì)胞化學(xué)及Western blot結(jié)果均顯示細(xì)胞系RMG-I-hFUT、卵巢癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移株HO8910PM及耐藥株COC1DDP中CD147蛋白表達(dá)較其親本細(xì)胞均明顯升高(P均＜0.05);H08910PM細(xì)胞及COC1DDP細(xì)胞中CD147 mRNA表達(dá)分別為其親本細(xì)胞的約1.61倍和3.52倍(P均＜0.05),而RMG-I-hFUT細(xì)胞中CD147基因表達(dá)降為親本的62％(P

6、＞0.05)。免疫沉淀結(jié)果顯示六種細(xì)胞的CD147分子都與Lewisy抗原共表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1、CD147分子寡糖鏈中具有Lewisy結(jié)構(gòu),Lewisy抗原表達(dá)增加增進(jìn)細(xì)胞系RMG-I-hFUT中CD147分子的表達(dá),Lewisy抗原在CD147介導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞粘附中起到重要作用。
　　 2、六種卵巢癌細(xì)胞RMG-I-hFUT\RMG-I、HO8910PM＼HO8910、COC1DDP＼COC1中CD