經(jīng)靜脈移植骨髓間質(zhì)干細(xì)胞治療急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分經(jīng)靜脈移植的人源骨髓間質(zhì)干細(xì)胞歸巢大鼠的梗死心臟;目的:探討經(jīng)外周靜脈途徑移植的人源性骨髓間質(zhì)干細(xì)胞在急性心肌梗死大鼠體內(nèi)的分布規(guī)律,為將來可能的臨床應(yīng)用做初步的探索.方法從健康志愿者獲取原代骨髓間質(zhì)干細(xì)胞行體外培養(yǎng)、擴(kuò)增,結(jié)扎雄性SD大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支制備心肌梗死模型,72h后分別經(jīng)心梗、正常、假手術(shù)大鼠尾靜脈注射骨髓間質(zhì)干細(xì)胞1×10<'6>,移植術(shù)后48h處死動(dòng)物,于心、肺、肝、脾取材,免疫組化法觀察BrdU標(biāo)記的移植細(xì)

2、胞在多個(gè)臟器的分布情況;用同樣方法觀察移植術(shù)后1個(gè)月標(biāo)記細(xì)胞在各組心臟的分布情況.結(jié)論:人源性骨髓間質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)外周靜脈移植后可歸巢至大鼠的梗死心臟并存活1個(gè)月,可能成為將來治療急性心肌梗死的另一種選擇.第二部分 經(jīng)靜脈移植骨髓間質(zhì)干細(xì)胞可改善大鼠梗死心臟的功能;目的:探討經(jīng)外周靜脈途徑移植骨髓間質(zhì)干細(xì)胞治療急性心肌梗死的有效性和可能的機(jī)制.方法采用左前降支冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)制備大鼠心肌梗死模型,24h后經(jīng)尾靜脈注入同種異體骨髓間質(zhì)干細(xì)胞或磷

3、酸緩沖液;分別于移植后3d和1月取材,采用ELISA和免疫組化技術(shù)分析細(xì)胞移植對(duì)梗死心臟血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)的影響,通過免疫組化染色觀察移植細(xì)胞的分化情況和計(jì)數(shù)血管密度;超聲心動(dòng)圖及血流動(dòng)力學(xué)檢查監(jiān)測(cè)移植術(shù)后上述時(shí)間點(diǎn)大鼠心功能的變化.結(jié)論:通過促進(jìn)梗死周邊缺血心肌的血管新生和移植細(xì)胞分化,骨髓間質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)外周靜脈的移植可作為急性心肌梗死治療的另一條有效路徑.第三部分 梗死心臟SDF-1的高表達(dá)可能有助于骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的定向

4、歸巢;目的:通常認(rèn)為間質(zhì)細(xì)胞源性因子(Stromal Derived Factor-1,SDF-1)是骨髓源性干細(xì)胞歸巢過程中的關(guān)鍵因素,本試驗(yàn)分別檢測(cè)了心梗以后不同時(shí)間點(diǎn)SDF-1的表達(dá)情況,試圖驗(yàn)證一種假設(shè):宿主梗死心肌SDF-1的高表達(dá)有助于骨髓間質(zhì)干細(xì)胞歸巢至缺血的心臟并進(jìn)一步改善心功能.方法從雄性SD大鼠獲取原代骨髓間質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)體外擴(kuò)增、BrdU標(biāo)記,結(jié)扎同品系大鼠冠脈左前降支建立心梗模型,1/2d、1d、2d、4d、8d、

5、16d后分別處死5只,用RT-PCR和Western blot方法分別檢測(cè)梗死心臟各時(shí)間點(diǎn)SDF-1的表達(dá).剩余心梗大鼠按上述時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為6組(n=15),每只動(dòng)物在心梗后相應(yīng)的各時(shí)間點(diǎn)分別經(jīng)尾靜脈注入5×10<'6>的同種異體骨髓間質(zhì)干細(xì)胞,3天后處死5只,計(jì)數(shù)歸巢至缺血心臟的標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量,其余動(dòng)物于移植后1月處死,分別采用組織學(xué)和免疫組化的方法觀察膠原的含量,血管新生數(shù)量和細(xì)胞分化情況,超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心梗前、細(xì)胞移植前、移植后1