血紅素氧合酶對大鼠肝臟缺血再灌注損傷鈣超載及細胞粘附因子的作用.pdf

1、休克、消化道出血以及肝臟移植等常不可避免引發(fā)肝臟缺血，血流再通后肝臟代謝功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷反而加重，這種現(xiàn)象就是肝臟缺血再灌注(IR)損傷。IR是普遍存在的病理生理過程，因此探索其損傷的機制，尋求保護缺血肝細胞的方法，是一項亟待解決的課題。 肝臟IR損傷是一個多因素的復(fù)雜過程，目前認為IR損傷發(fā)生的基本機制，主要是氧自由基(OFR)生成增多和細胞內(nèi)鈣超載的作用，同時炎癥反應(yīng)、中性粒細胞浸潤、微循環(huán)障礙也與IR損傷關(guān)系密切。

2、 血紅素氧合酶(HO)主要分布在肺臟、肝臟、脾臟、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，是血紅素代謝的限速酶，分解血紅素形成等量的一氧化碳(CO)及膽綠素并釋放鐵原子。HO及其代謝產(chǎn)物通過抗氧化、抗炎癥、維持微循環(huán)等作用對抗IR損傷。 細胞內(nèi)鈣超載被認為是細胞不可逆損傷的共同通路。在生理情況下，細胞內(nèi)Ca2+濃度主要依賴細胞膜Ca2+-ATP酶對Ca2+的運輸來調(diào)控。 中性粒細胞是參與IR損傷過程的重要細胞成份之一。細胞間粘附因子(ICAM-

3、1)是介導(dǎo)中性粒細胞與內(nèi)皮細胞粘附的主要粘附因子，在再灌注損傷中起重要作用。 目的：本研究應(yīng)用HO誘導(dǎo)劑(hemin)和抑制劑(ZnPP)來研究HO-CO系統(tǒng)對大鼠肝臟IR損傷Ca2+-ATP酶和ICAM-1的影響。 方法： 1.模型的制備與分組：以10％水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠后，取腹正中切口入腹，顯露肝臟，血管夾住肝中葉和左外側(cè)葉的肝動脈、門靜脈，造成70％肝臟缺血模型。鉗夾45min后，松開血管鉗，恢復(fù)血

4、流，大鼠IR模型制備完成。取肝中葉及靜脈血作為實驗標本。將雄性SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、IR組、hemin組、ZnPP組。其中hemin組于術(shù)前12h腹腔內(nèi)注射hemin20mg/kg，再進行IR；ZnPP組于術(shù)前3h和16h，分兩次腹腔內(nèi)注射ZnPP各10μmol/kg，然后進行IR。 2.生化指標測定：在再灌注0h、90min、4h、8h，取血漿，測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)。 3.C

5、a2+-ATP酶的活性的測定：取肝組織制成組織勻漿，用化學(xué)比色法，具體操作按南京建成生物工程研究所提供的測試盒說明書進行。 4.肝臟組織學(xué)檢查：采用石蠟切片，HE染色。 5.ICAM-1免疫組織化學(xué)染色：脫蠟至水，抗原熱修復(fù)后，用3％過氧化氫孵育10min。封閉一抗4℃過夜，陰性對照用PBS代替一抗。先后滴加二抗、三抗各17min，后用3,3-二氨基苯聯(lián)胺(DAB)顯色，復(fù)染后封片。 結(jié)論： 1.肝臟IR

6、損傷后，肝功能出現(xiàn)損害，表現(xiàn)為ALT、AST水平增高。組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為肝細胞腫脹、脂肪變性、炎細胞浸潤、肝竇擴張和細胞壞死等表現(xiàn)。hemin能有效的減輕IR損傷所造成的肝功能損害，表現(xiàn)在ALT、AST水平降低；肝細胞腫脹、變性減輕。ZnPP則加重IR損傷，表現(xiàn)與hemin作用相反。 2.肝臟IR損傷后，Ca2+-ATP酶活力隨時間的延長而降低。hemin能夠增加Ca2+-ATP酶活力；而ZnPP可使Ca2+-ATP酶活力明顯降低