TACI-Ig融合蛋白對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用及初步機制.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種慢性、炎癥性、系統(tǒng)性自身免疫病。T、B淋巴細(xì)胞的紊亂在RA的病程進展中發(fā)揮著重要作用。近年來,B淋巴細(xì)胞在RA致病機制中的作用逐漸得到了人們的廣泛重視。研究發(fā)現(xiàn),B淋巴細(xì)胞具有識別抗原和向T細(xì)胞遞呈抗原的能力,能夠提供共刺激信號協(xié)助T淋巴細(xì)胞激活,可以分泌腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor-alpha,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)

2、等炎癥因子和產(chǎn)生類風(fēng)濕因子(rheumatoidfactor,RF)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-cycliccitrullinatedpeptide,抗-CCP)等自身抗體以及在異位生發(fā)中心(germinalcenter,GC)反應(yīng)中的促進作用。B淋巴細(xì)胞刺激因子(Blymphocytestimulator,BLyS)及其同系物增殖誘導(dǎo)配體(aproliferation-inducingligand,APRIL)在B淋巴細(xì)胞的發(fā)育、分

3、化和成熟過程中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn),BLyS和APRIL水平的異常與RA、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)等自身免疫病的發(fā)病密切相關(guān)。
　　由BlyS的受體跨膜激活劑及鈣調(diào)親環(huán)素配體相互作用分子(transmembraneactivatororcalcium-modulatingcyclophylinligand-interactor,TACI)的胞外段和人免疫球蛋白(immuno

4、globulin,Ig)G1的Fc段通過生物工程技術(shù)構(gòu)成的TACI-Ig融合蛋白作為一種誘騙受體,能夠競爭性結(jié)合BLyS、APRIL,并且中和BLyS與APRIL的活性。研究發(fā)現(xiàn),TACI-Ig不僅可以抑制B淋巴細(xì)胞的發(fā)育和分化,減少成熟B淋巴細(xì)胞的數(shù)量,還可以抑制部分T淋巴細(xì)胞的激活。進一步研究發(fā)現(xiàn),TACI-Ig顯著緩解小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎(collagen-inducedarthritis,CIA)和SLE小鼠的疾病表現(xiàn),改善其病理特

5、征。目前,有關(guān)TACI-Ig(atacicept)治療RA和SLE等自身免疫病的臨床試驗正在研究中。佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvantarthritis,AA)不同于CIA,它是一種主要以T淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的,以細(xì)胞免疫為優(yōu)勢的實驗性關(guān)節(jié)炎模型,迄今為止,尚無有關(guān)TACI-Ig對大鼠AA治療作用的報道。本實驗以AA大鼠為研究對象,探討TACI-Ig如何通過影響大鼠脾臟中輔助性T淋巴細(xì)胞(Thelperlymphocyte,Th)相關(guān)

6、炎癥因子和漿細(xì)胞產(chǎn)生的Ig水平進而發(fā)揮對AA繼發(fā)性炎癥的治療作用。
　　目的:
　　觀察TACI-Ig對AA大鼠的關(guān)節(jié)炎評價、病理學(xué)表現(xiàn)、脾臟和胸腺指數(shù)的改善作用;觀察TACI-Ig對AA大鼠脾臟中BLyS,Th17相關(guān)細(xì)胞因子IL-17,Th1相關(guān)細(xì)胞因子干擾素(interferon-gamma,IFN-γ)以及IgG1、IgG2a、IgM水平的影響;分析關(guān)節(jié)炎評價與脾臟中BLyS、IL-17、IFN-γ、IgG1、IgG

7、2a、IgM水平的相關(guān)性;從整體、器官和細(xì)胞因子的水平上,探討TACI-Ig對大鼠AA的治療作用及初步機制。
　　方法:
　　通過大鼠右后足跖皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(completeFreund’sadjuvant,CFA)建立大鼠AA模型。模型建立成功后,將大鼠分為正常對照組,模型對照組,TACI-Ig(0.7、2.1、6.3mg/kg)治療組,rhTNFR:Fc(2.8mg/kg)陽性藥對照組,IgG-Fc(6.3mg/k

8、g)陰性藥對照組,各給藥組均采用皮下注射方式,兩天給藥一次。通過關(guān)節(jié)炎評分和足爪腫脹數(shù)評價大鼠AA的病變情況;通過蘇木素和伊紅(hematoxylinandeosin,HE)染色顯微鏡下觀察脾臟和踝關(guān)節(jié)的組織病理學(xué)變化;計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù);采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)檢測AA大鼠脾臟中BLyS、IL-17、IFN-γ和IgG1、IgG2a、IgM的水平變化。采用Sp

9、earman相關(guān)系數(shù)分析關(guān)節(jié)炎評分與脾臟中BLyS、IL-17、IFN-γ、IgG1、IgG2a、IgM水平的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1TACI-Ig緩解AA大鼠的關(guān)節(jié)炎表現(xiàn),改善脾臟和踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)表現(xiàn),降低脾臟指數(shù)
　　AA大鼠的繼發(fā)性炎癥反應(yīng)發(fā)生在造模后第15天左右。AA大鼠的關(guān)節(jié)炎評分和足爪腫脹數(shù)顯著升高;組織病理學(xué)表現(xiàn)為光學(xué)顯微鏡下脾臟白髓中動脈周圍淋巴鞘(periarteriallymphaticshe

10、ath,PALS)和邊緣區(qū)(marginalzone,MZ)增厚,淋巴小結(jié)增多增大,GC形成,踝關(guān)節(jié)滑膜組織中滑膜細(xì)胞增生明顯、層次增多、炎癥細(xì)胞浸潤、血管翳形成、關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞;脾臟指數(shù)顯著增加。TACI-Ig降低AA大鼠的關(guān)節(jié)炎評分和足爪腫脹數(shù),改善脾臟和踝關(guān)節(jié)滑膜的病理表現(xiàn),降低脾臟指數(shù)。
　　2TACI-Ig降低AA大鼠脾臟中BLyS、IL-17、IFN-γ和Ig的水平
　　AA大鼠脾臟中的BLyS水平較之于正常大

11、鼠顯著升高,IL-17、IFN-γ和IgG1、IgG2a、IgM的水平也顯著升高。TACI-Ig降低AA大鼠脾臟中升高的BLyS、IL-17、IFN-γ、IgG1、IgG2a、IgM的水平。相關(guān)性分析表明,AA大鼠關(guān)節(jié)炎評分的降低與TACI-Ig降低AA大鼠脾臟中升高的BLyS、IL-17、IFN-γ、IgG2a水平密切相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1TACI-Ig降低AA大鼠的關(guān)節(jié)炎評分和足爪腫脹數(shù),改善脾臟和踝關(guān)節(jié)的病理表現(xiàn),