Tim-3-Galectin-9在小鼠急性移植物抗宿主病中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：異基因骨髓移植（Allo-BMT）是治療造血系統(tǒng)疾病（再生障礙性貧血、白血病等）最有效的方法，但移植物抗宿主?。℅VHD）又是Allo-BMT后最主要的并發(fā)癥和移植失敗的重要因素。急性GVHD(aGVHD）是典型的由供體Ⅰ型輔助性T淋巴細(xì)胞（T helper type 1，Th1）介導(dǎo)的異體免疫反應(yīng)。Tim-3是Th1細(xì)胞的特異性細(xì)胞表面標(biāo)志，與其配體Galectin-9結(jié)合可下調(diào)Th1型免疫反應(yīng)并誘導(dǎo)外周耐受。本研究通過建立小鼠

2、急性移植物抗宿主病模型，檢測(cè)Tim-3、Galectin-9在aGVHD小鼠各組織器官的表達(dá)情況，從而探討Galectin-9-Tim-3途徑在急性移植物抗宿主病發(fā)生和發(fā)展中可能存在的作用，為進(jìn)一步利用Galectin-9-Tim-3通路抑制aGVHD反應(yīng)甚至誘導(dǎo)免疫耐受做初步探索。
　　 方法：以BALB/c(H-2 b）雌性小鼠為受者，接受致死劑量的γ射線（8.0Gy）全身照射后，輸注雄性C57BL/6(H-2 d）供鼠的骨

3、髓細(xì)胞和脾細(xì)胞，觀察受鼠的體征、造血功能恢復(fù)時(shí)間的變化。同時(shí)設(shè)立單純照射組（無骨髓細(xì)胞和脾細(xì)胞輸注）和同基因移植組（輸注BALB/c(H-2 b））雌性小鼠的骨髓細(xì)胞和脾細(xì)胞）。采用HE染色方法對(duì)aGVHD小鼠肝、腸和皮膚進(jìn)行病理學(xué)檢查。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)方法（PCR）檢測(cè)嵌合體。應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)aGVHD小鼠脾臟CD8+/CD4+Tim-3 +T細(xì)胞的表達(dá)情況。Western Blot法檢測(cè)aGVHD小鼠肝和小腸組織Tim-3、G

4、alectin-9 在蛋白水平的表達(dá)，并分析及其表達(dá)與aGVHD的關(guān)系。
　　 結(jié)果：(1）模型組小鼠在移植后出現(xiàn)豎毛、弓背、腹瀉、脫毛等典型的GVHD 癥狀，腸、肝、皮膚和腎的病理學(xué)分析均屬于Ⅳ度GVHD。(2)嵌合體植入成功。移植后第14天造血功能恢復(fù),外周血白細(xì)胞約（2.25±0.2）×10 9/L，移植后第21天后外周血白細(xì)胞約（4.05±0.8）×10 9/L，第28天左右數(shù)量急劇下降，最終因aGVHD 而死亡。異基因

5、移植組和同基因移植組外周血WBC數(shù)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）（3）以移植后14、21、28d 為檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)aGVHD小鼠外周血和脾CD8+Tim-3 +和CD4+Tim-3+T淋巴細(xì)胞于移植后第14、21天較移植前上調(diào),21天后則逐漸下降至基線水平，與正常小鼠相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。（4）aGVHD小鼠肝臟和小腸組織Tim-3表達(dá)較移植前上調(diào)，而Galectin-9的表達(dá)水平則較移植前下降。