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文檔簡介
1、目的:構(gòu)建包含單純皰疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D的克隆載體及表達載體;將HSV-I gD基因在畢赤酵母菌GS115株中表達,挑選穩(wěn)定高效表達株,建立酵母表達系統(tǒng);將表達產(chǎn)物作為包被抗原,建立一種特異性和靈敏性較高、簡便、快速的ELISA方法,從而為快速準確地診斷、治療HSV感染和疫苗的研制與開發(fā)奠定基礎.方法:根據(jù)GeneBank中HSV-I gD的保守序列,設計引物,通過PCR擴增包膜糖蛋白gD全基因,將目的基因先克隆至于pMD18T載體上
2、,建立克隆載體,測序并用BLAST軟件進行同源序列比較,觀察核酸以及氨基酸變異情況;目的基因經(jīng)雙酶切與酵母表達載體pGAPZαA連接,測序以確定其序列,利用TmPred和Swiss-Model軟件預測其跨膜區(qū)及三維結(jié)構(gòu),分析氨基酸變異及α信號肽與組氨酸尾的表達對HSV-I gD蛋白抗原性的影響;用LiCl法將線性化的重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)導入畢赤酵母GS115株,建立酵母表達系統(tǒng);表達產(chǎn)物以Western Blot進行鑒定,將重組抗原包被ELI
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