人胃癌及癌旁來源的間質(zhì)干樣細胞分離鑒定及其差異比較.pdf

1、目的：探討胃癌患者組織中是否能分離培養(yǎng)出胃癌間質(zhì)干樣細胞(mesenchymal stem cells-like cells from human gastric cancer，hGC-MSCs)及癌旁間質(zhì)干樣細胞(mesenchymal stem-like cells fromhuman gastric cancer adiacent non-cancerous tissues，hGCN-MSCs)，鑒定其生物學(xué)特性，并且進行兩者間差

2、異比較。
　　 方法：采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)120例胃癌患者的胃癌及癌旁組織，在含有l(wèi)O％胎牛血清，低糖DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)、增殖并進行傳代。通過測定生長曲線、細胞周期、流式分析表面標記、染色體分析等，對其進行形態(tài)學(xué)、細胞與分子遺傳學(xué)分析；提取細胞株的總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，檢測干細胞相關(guān)基因的表達情況；成脂成骨誘導(dǎo)實驗檢測干細胞的多潛能分化能力；免疫組織化學(xué)在蛋白水平上驗證hGC-MSCs和hGCN-MSCs中a-SM

3、A、CKl8、PCNA、P53、ABCG2及SALL4的表達水平差異；Transwell遷移實驗檢測兩者遷移能力的差異；染色體分析、裸鼠致瘤實驗檢測其干細胞特性和致瘤特性。
　　 結(jié)果：組織塊貼壁法分離培養(yǎng)120例胃癌患者胃癌及癌旁組織，共分離培養(yǎng)出35株hGC-MSCs和22株hGCN-MSCs細胞，其中配對樣本細胞株11對，實驗采用配對細胞株進行分析鑒定。生長曲線、細胞周期檢測顯示hGC-MSCs增殖速率明顯高于hGCN-M

4、SCs；流式分析表面標記顯示hGC-MSCs和hGCN-MSCs均表達干細胞相關(guān)標記:CD29、HLA-1、CDl05；但不表達CDl4、CD31、CD34、CD71; hGC-MSCs CD44、CDl3表達陽性，而hGCN-MSCs CD44、CDl3表達陰性; RT-PCR檢測顯示兩者均表達干細胞相關(guān)基因：Oct-4、Nanog、Bmi-1、Nucleostemin、ABCG2，以及間質(zhì)干細胞相關(guān)基因：CD44、CD73、a-SM

5、A、TGF-β、 VEGF和IGF；hGC-MSCs、hGCN-MSCs均高表達N-cadherin但不表達E-cadherin；hGC-MSCs高表達而hGCN-MSCs低表達或不表達MDM2、p21、SALL4等基因；染色體分析、裸鼠致瘤實驗及成骨成脂誘導(dǎo)實驗結(jié)果表明hGC-MSCs及hGCN-MSCs具有正常間質(zhì)干細胞的特性；免疫組化分析顯示hGC-MSCs及hGCN-MSCsa-SMA、CKl8、PCNA、P53、ABCG2及S

6、ALL4染色陽性；Transwell遷移實驗顯示hGC-MSCs遷移率高于hGCN-MSCs。
　　 結(jié)論：采用組織塊貼壁法成功分離培養(yǎng)了人胃癌問質(zhì)干樣細胞(hGC-MSCs)與人癌旁間質(zhì)干樣細胞(hGCN-MSCs)，體外增殖、分化試驗、染色體分析和裸鼠體內(nèi)致瘤試驗證實了該細胞具有正常間質(zhì)干細胞的特性。二者在細胞形態(tài)、基因表達、及多潛能分化能力上具有相似性，但在細胞表面標志、細胞周期及增殖性相關(guān)基因的表達等方面具有較明顯的差異