切割bcl-2 mRNA核酶對人膽管癌細(xì)胞的促凋亡作用.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文切割bcl-2 mRNA核酶對人膽管癌細(xì)胞的促凋亡作用姓名：范毓東申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)(肝膽外科)指導(dǎo)教師：李開宗2000.5.1第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 摘要濃度及作用時間建立一促膽管癌細(xì)胞凋亡模型，在此基礎(chǔ)上與切割b c l -2 m R N A 核酶聯(lián)合應(yīng)用，觀察該核酶是否能夠增加膽管癌細(xì)胞對抗癌藥物促凋亡作用的敏感性。最后，將Q B C 。細(xì)胞( 5 ×1 0 6 ) 接種于裸小鼠的皮

2、下，建立一荷膽管癌裸小鼠模型；再將經(jīng)轉(zhuǎn)染核酶基因的膽管癌細(xì)胞接種于裸鼠皮下，觀察該腫瘤細(xì)胞的致瘤情況。重組后的載體用B a m HI + E c o R I 酶切后，經(jīng)o 8 ％瓊脂糖凝膠電泳可見6 5 k b 長的載體；經(jīng)1 2 ％聚丙烯酰胺電泳可觀察到5 l b p 長的核酶D N A 片段。酶切鑒定表明：核酶基因已成功地與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體重組，定向克隆于真核細(xì)胞表達載體p D O R —F ／e o 的B a m H I 和E c

3、o R I 位點；重組后的真核表達載體被命名為p D O R —R Z 。轉(zhuǎn)染切割b c l - 2m R N A核酶基因的膽管癌細(xì)胞b c l - 2 表達水平較對照組下降約1 2 6 2 ％，并出現(xiàn)自發(fā)性細(xì)胞凋亡現(xiàn)象( 凋亡率為8 8 ％) ：該核酶基因還能夠增加膽管癌細(xì)胞對阿霉素促凋亡作用的敏感性『核酶+ 阿霉素( 2 0m o l ／L X 30h ) ，凋亡率為1 21 ％】。1 0 只裸小鼠中有8 只形成皮下腫瘤結(jié)節(jié)，移植成

4、功率為8 0 ％；移植瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)與膽管癌相似。轉(zhuǎn)染切割b c l - 2m R N A核酶基因的膽管癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)致瘤性( 0 ／5 ) 較對照組( 8 ／1 0 和5 ／5 )、明顯下降。} ～v 一～ ／本實驗結(jié)果表明：①切割b c l - 2m R N A 核酶基因能明顯降低膽管癌細(xì)胞內(nèi)b c l - 2 的表達水平并可誘導(dǎo)其出現(xiàn)自發(fā)性凋亡；②該核酶基因能夠增加膽管癌細(xì)胞對阿霉素促凋亡作用的敏感性；③荷瘤裸小鼠模型的建立為膽