腎絡(luò)癥瘕的生物學基礎(chǔ)及腎炎防衰液的干預研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的根據(jù)慢性腎臟疾病的臨床研究基礎(chǔ),結(jié)合中醫(yī)絡(luò)病和癥瘕理論,提出了腎絡(luò)癥瘕病機理論。研究5/6腎切除腎小球硬化動物模型的病理機制,探討腎絡(luò)癥瘕致“腎絡(luò)病”的病機及物質(zhì)、結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),以腎炎防衰液作為載體,研究其治療腎小球硬化的分子機制,為中西醫(yī)結(jié)合防治腎纖維化提供理論基礎(chǔ)和動物實驗的資料,實現(xiàn)中醫(yī)藥學的基礎(chǔ)理論與現(xiàn)代醫(yī)學理論實質(zhì)性的鏈接。 方法1采用5/6腎切除的方法制備大鼠腎小球硬化的動物模型。于造模后17w采血,檢測血清CRE、

2、BUN含量;取大鼠腎組織常規(guī)石蠟包埋、切片,做HE染色、Mallory染色、六胺銀和Masson染色。 2以正常大鼠做陰性對照,采用免疫組化法檢測腎組織CTGF、FN及LN蛋白表達;采用原位雜交法檢測腎組織CTGF表達;采用Western-blot法檢測腎組織CTGF蛋白含量。 3造模結(jié)束后,將大鼠隨機分成8組:A正常大鼠作陰性對照(生理鹽水灌胃),B假手術(shù)組(生理鹽水灌胃),C模型組(生理鹽水代替藥物灌胃),D陽性藥治

3、療組(洛汀新),E陽性藥治療組(尿毒清),F(xiàn)腎炎防衰液高劑量治療組,G腎炎防衰液中劑量治療組,H腎炎防衰液低劑量治療組,分別檢測術(shù)后1w,4w、8w、12w、15w五個時間點大鼠24h尿蛋白,血壓的變化,術(shù)后0w,2w、4w、6w、8w、10w、12w、14w八個時間點的體重變化,治療15w后取材。采用生化分析的方法檢測血清CRE、BUN含量;腎組織常規(guī)石蠟切片HE染色、Mallory染色、六胺銀和Masson染色;腎組織石蠟切片CTG

4、F、FN及LN免疫組化顯色;原位雜交法檢測腎組織CTGF表達;腎組織CTGF蛋白含量Western-blot分析。 4采用SPSS11.0軟件對相關(guān)實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理,求平均數(shù),作單因素方差分析。 結(jié)果通過以上實驗得到下列結(jié)果:1腎纖維化進行階段,血清中CRE、BUN含量顯著升高;2實驗性腎纖維化存在不同的發(fā)病機制,5/6腎切除腎小球硬化主要病理特征是細胞外基質(zhì)的過度積聚,主要表現(xiàn)是系膜基質(zhì)的增多或系膜區(qū)增寬,基底膜

5、增厚及不規(guī)則,腎小球毛細血管袢的閉塞并伴過濾面積的減少; 3CTGF過度表達是腎纖維化的關(guān)鍵因子,細胞外基質(zhì)FN,LN高表達是腎纖維化形成的重要因素; 4從腎小球硬化的病理機制得到腎絡(luò)癥瘕病機理論,中醫(yī)病機包括5個連續(xù)的病理階段:血行不暢、絡(luò)脈失養(yǎng)、氣血瘀滯、津凝痰結(jié)、絡(luò)毒蘊結(jié); 5腎炎防衰液抗腎纖維化的作用機制主要為: 5.1通過某種機制抑制機體產(chǎn)生CTGF,從而抑制細胞外基質(zhì)的積聚;5.2抑制細胞外基

6、質(zhì)FN,LN的表達,從而減緩腎纖維化的進程;5.3保護腎細胞,修復腎細胞損傷,降低血CRE、BUN;5.4通過干預CTGF蛋白表達及其信號傳導途徑而阻斷腎纖維化的進行。 結(jié)論 通過統(tǒng)計學分析及各指標間關(guān)系的深入探討,研究結(jié)論如下:1腎小球硬化的主要表現(xiàn)是系膜基質(zhì)的增多或系膜區(qū)增寬,基底膜增厚及不規(guī)則,腎小球毛細血管袢的閉塞并伴過濾面積的減少的病理特征,其主要特點是細胞外基質(zhì)的過度積聚; 2腎纖維化形成過程促纖維生

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