硫酸鎳對小鼠精原細(xì)胞毒作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：初步建立小鼠精原細(xì)胞體外分離、純化及培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)方法,并探討硫酸鎳對小鼠精原細(xì)胞的毒作用。
　　 方法：選擇健康昆明種6～8天雄性小鼠,摘取睪丸組織,采用組合酶消化法制備小鼠睪丸細(xì)胞懸液,Percoll不連續(xù)密度梯度法分離精原細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)進(jìn)一步純化精原細(xì)胞,用堿性磷酸酶染色鑒定。分離純化的精原細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),至生長狀態(tài)良好時(shí),用25、50、100、200、400、800μ mol/L硫酸鎳染毒,以染毒后6h、12h、24h、

2、36h為觀察終點(diǎn),用MTT法和乳酸脫氫酶(LDH)法檢測鎳對小鼠精原細(xì)胞的毒作用；采用透射電鏡觀察硫酸鎳染毒后精原細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果：用組合酶消化和Percoll不連續(xù)密度梯度法,分離6-8d小鼠的精原細(xì)胞,可以獲得純度較高、基本滿足體外實(shí)驗(yàn)要求的精原細(xì)胞；MTT結(jié)果顯示,隨著染毒濃度的增加和染毒時(shí)間的延長,10μmol/L鎳染毒6h細(xì)胞生長抑制(P＜0.05),在6h、12h、24h、36h都存在劑量-效應(yīng),在2

3、5、50、100、200、400、800μ mol/L的濃度下都存在時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,其染毒24小時(shí)IC50為48μmol/L,染毒36小時(shí)IC50為42μmol/L。隨著染毒濃度的增加和染毒時(shí)間的延長,100μmol/L鎳染毒6h細(xì)胞溶解液LDH活力開始降低(P＜0.05),并呈現(xiàn)出劑量依賴性和時(shí)間依賴性；透射電鏡可見,精原細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,隨著染毒劑量和染毒時(shí)間的延長,出現(xiàn)細(xì)胞皺縮,細(xì)胞膜破裂,大量內(nèi)容物外溢,細(xì)胞器嚴(yán)重破壞,