HGF-c-Met對左向右分流繼發(fā)肺動脈高壓大鼠肺血管重構(gòu)的影響.pdf

1、研究背景和目的
　　 左向右分流型先天性心臟病使肺循環(huán)長期處于高灌注狀態(tài),肺動脈管壁承受血流沖擊的機械應(yīng)力持續(xù)過度增加,致使內(nèi)皮細胞(endothelial cell,EC)受損、平滑肌細胞(smooth muscle cell,SMC)增生、肺血管管腔狹窄,肺血管發(fā)生重構(gòu)(pulmonary vascularremodeling,PVR),形成肺動脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)

2、。PAH程度直接影響患者的治療及預(yù)后,進入肺動脈高壓晚期,治療困難,預(yù)后不良。對于左向右分流型先天性心臟病PAH形成過程、機制、干預(yù)和預(yù)防的研究仍是值得研究的重要課題。
　　 近年來在缺血性心肌病方面的研究發(fā)現(xiàn)肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)具有較強的促血管內(nèi)皮細胞增生,修復(fù)血管內(nèi)皮作用。它通過促進血管內(nèi)皮細胞分化、增生,保護血管內(nèi)皮,具有抑制內(nèi)皮細胞凋亡的作用,并可抑制纖維化反應(yīng)。研究

3、表明外源性HGF可促進兔心肌梗死后缺血部位的血管內(nèi)皮細胞增生,修復(fù)受損的血管內(nèi)膜防止血栓形成,并可促進形成新的微血管。原癌基因編碼蛋白Met(mesenchymal-epithelial transition factor,c-Met)是至今唯一被認識的HGF高親合力受體。目前,對損傷細胞修復(fù)和血管形成的作用和機制等方面的研究備受關(guān)注。
　　 HGF/c-Met在左向右分流肺動脈高壓的肺組織的表達情況以及HGF/c-Met對此類

4、肺動脈高壓的肺血管重構(gòu)有何影響仍不得而知,該問題值得研究。本課題建立左向右分流型PAH大鼠模型,并給予外源性的HGF,通過運用生理記錄儀和病理學(xué)方法分別觀察血流動力學(xué)和肺血管結(jié)構(gòu)的變化,運用免疫組織化學(xué)、Western blotting等方法分析HGF、c-Met在左向右分流型PAH大鼠肺組織的表達,運用免疫組織化學(xué)方法檢測半胱氨酸的天門冬氨酸蛋白酶-3(cysteine-aspartic proteases-3,Caspase-3)、

5、增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在大鼠肺組織的表達,以及運用TUNEL法檢測肺動脈平滑肌細胞的凋亡情況,從而研究HGF/c-Met對左向右分流型PAH大鼠肺動脈SMC的增殖與凋亡的調(diào)節(jié)作用以及對左向右分流型PAH的PVR的影響。
　　 本課題將為探討左向右分流型PAH形成的機制及HGF/c-Met對左向右分流型PAH的PVR的影響提供實驗依據(jù)及理論指導(dǎo)。
　　

6、 方法
　　 本研究分為兩部分
　　 第一部分:HGF/c-Met在左向右分流繼發(fā)肺動脈高壓大鼠肺血管中的表達及作用。雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,隨機均分為對照組(Control Group),分流組(ShuntGroup)和HGF組(HGF Group),分流組及HGF組行套管法頸總動脈-頸外靜脈分流術(shù)以建立左向右分流繼發(fā)肺動脈高壓大鼠模型,對照組行假手術(shù),HGF組于術(shù)后第3天開始予腹腔注射HGF蛋

7、白2mg/kg/日。分流組和HGF組分別于術(shù)后第4、8、12、16周行超聲檢查明確分流血管的通暢性,檢測肺動脈壓力、右心室肥大指數(shù)等;常規(guī)HE染色觀察肺小動脈重構(gòu)的病理變化,計算機圖像分析系統(tǒng)測量肺動脈管壁厚度占外徑的百分比(MT％);免疫組織化學(xué)和Western blotting檢測HGF、c-Met蛋白在肺動脈的表達。
　　 第二部分:HGF/c-Met對左向右分流繼發(fā)肺動脈高壓大鼠肺血管平滑肌細胞凋亡和增殖的影響及意義

8、r>　　 免疫組織化學(xué)檢測Caspase-3、PCNA蛋白在肺中等動脈的表達,Western blotting檢測Caspase-3蛋白在肺組織的表達,脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶缺口末端標記(TUNEL)法檢測肺中等動脈SMC凋亡情況,計算機圖像分析系統(tǒng)測量肺中等動脈中層凋亡細胞數(shù)占SMC數(shù)的百分比(apoptotic index,AI),及增殖細胞數(shù)占SMC數(shù)的百分比(proliferation index,PI)。
　　 結(jié)

9、論
　　 1.套管法頸總動脈-頸外靜脈分流術(shù)可造成大鼠類似左向右分流型先天性心臟病,可導(dǎo)致肺動脈壓力持續(xù)升高,肺中等動脈管壁中層增厚,右心室肥厚等,藉此成功建立左向右分流繼發(fā)肺動脈高壓大鼠模型;
　　 2.左向右分流繼發(fā)肺動脈高壓大鼠肺組織中HGF、c-Met蛋白的表達與肺動脈壓力及肺中等動脈管壁厚度百分比呈負相關(guān);外源性HGF可有效提高HGF、c-Met蛋白在模型大鼠肺組織的表達,降低其肺動脈壓力;
　　 3.