博萊霉素發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化研究.pdf

1、博萊霉素(Bleomycin)是從輪枝鏈霉菌(Streptomycesverticillus)發(fā)酵產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的具有抗腫瘤活性的多組分糖肽類抗生素，各組分區(qū)別在于末端胺的不同。博萊霉素是廣譜，低毒的抗腫瘤藥物，對惡性淋巴瘤、頭頸部癌、乳腺癌和食道癌有良好的療效，還對發(fā)病率高，又無有效藥物治療的肝癌有較滿意的療效。因此提高博萊霉素在發(fā)酵液中的含量具有非常重要的意義。 從博萊霉素的搖瓶發(fā)酵著手，對培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，并考察

2、了前體加入時(shí)間和加入濃度對博萊霉素產(chǎn)量的影響?？疾炝颂荚?、有機(jī)氮源、無機(jī)氮源、磷酸鹽和CuSO4對博萊霉素發(fā)酵的影響，確定了最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖1％，麥芽糖3％，可溶性淀粉3％，大豆蛋白胨0.5％，黃豆餅粉3％，玉米漿1％，豆油0.5％，NaCl0.3％，K2HPO40.1％，ZnSO40.05％，CuSO40.01％，NaNO30.3％，優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基使鏈霉菌StreptomycesverticillusU-43在搖瓶培養(yǎng)

3、條件下博來霉素的產(chǎn)量達(dá)到41.23μg/ml。在對鏈霉菌StreptomycesverticillusU-43的培養(yǎng)條件優(yōu)化的過程中，分別考察了接種齡、接種量、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值、搖瓶裝液量對發(fā)酵的影響，結(jié)果表明：鏈霉菌StreptomycesverticillusU-43的最適接種齡為48h，最佳培養(yǎng)溫度為28℃，發(fā)酵培養(yǎng)基的最適初始pH為6.0，接種量為6％，搖瓶裝液量為80ml/500ml△。經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化后，鏈霉菌Stre

4、ptomycesverticillusU-43在搖瓶培養(yǎng)條件下博萊霉素的產(chǎn)量達(dá)到46.11μg/ml。采用優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件，并在發(fā)酵進(jìn)行至60h添加0.04mg/ml的前體精胺，可明顯提高效價(jià)，其搖瓶效價(jià)達(dá)62.21μg/ml。 以搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，進(jìn)行了博萊霉素發(fā)酵由搖瓶到16L發(fā)酵罐的放大，考察了輪枝鏈霉菌(Streptomycesverticillus)U-43在16L發(fā)酵罐中的代謝特性，包括發(fā)酵過程中的p