版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、研究苯及代謝物對體外培養(yǎng)正常人骨髓單個核細胞和臨床苯中毒患者骨髓單個核細胞ToPoⅡα表達和活性的影響.探討ToPoⅡα表達的調控機制即ToPoⅡα啟動子、啟動子調控因子組蛋白乙酰化、甲基化水平改變.觀察染苯人群或氫醌接觸后骨髓單個核細胞ToPo Ⅱα mRNA水平的動態(tài)變化,探索TOPOⅡα啟動子開始出現(xiàn)變化的時間.為更進一步認識苯中毒相關疾病的發(fā)病機理及相關疾病的診療提供一定的依據(jù). 方法: 1.Western Bl
2、ot法測定苯及代謝物對人骨髓單個核細胞ToPo Ⅱα含量變化的影響. 2.DNA超螺旋解旋法檢測撲異構酶Ⅱ的活性:運用ToPo Ⅱ檢測試劑盒檢測去連環(huán)動質DNA(]kDNA)的水平. 3.RT-PCR檢測體外氫醌(苯代謝產物)處理實驗及臨床苯中毒病例ToPo Ⅱα mRNA水平的變化. 4.構建染色質免疫沉淀分析法(ChIP):在活細胞狀態(tài)下,用甲醛固定蛋白質-DNA復合物,然后用機械(超聲波)的手段將其隨機切斷
3、為一定長度范圍內的染色質小片段.利用目的蛋白質的特異抗體通過抗原-抗體反應形成DNA-蛋白質-抗體復合體,然后沉淀此復合體,特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段.經(jīng)蛋白質與DNA解偶聯(lián),DNA片段純化等處理后,用PCR等方法檢測與蛋白質的結合的DNA情況. 5.應用chIP技術,探討TOPOⅡα含量變化的可能機制:運用特異性抗體,檢測TOPOⅡα含量變化及ToPoⅡα啟動子及啟動子調控因子(SPl、ATF-2、SP3、NF-YA
4、、NF-M、P53、C-MYB、C-JUN、ICBP90)組蛋白H3,H4 乙?;癏3K4,H3K9甲基化水平改變的關系. 6.RT-PCR測定臨床苯中毒病例TOPOⅡα啟動子各調控因子mRNA表達水平的改變. 7.RT-FCR檢測氫醌(苯代謝產物)接觸不同時間后骨髓單個核細胞ToPoⅡα mRNA水平的動態(tài)變化,應用ChIP技術,探討TOPOⅡα啟動子開始出現(xiàn)變化. 結果: 1.體外實驗氫醌誘導的正常
5、人骨髓單個核細胞中TOPO Ⅱα含量較正常對照組明顯下降,具有顯著的統(tǒng)計學意義.(P<0.01). 2.體外氫醌誘導組及臨床苯中毒病例實驗檢測表明TOPO Ⅱα活性較對照組明顯受到抑制. 3.體外氫醌誘導組及臨床苯中毒病例實驗檢測表明TOPO Ⅱα mRNA水平較對照組明顯下降,具有顯著的統(tǒng)計學意義.(P<0.01). 4.成功構建染色質免疫沉淀分析法(ChIP). 5.體外氫醌誘導實驗表明TOPOⅡα含
6、量降低與TOPOⅡα啟動子組蛋白H4乙酰化水平、H3K4甲基化水平降低及H3K9甲基化水平升高有關:而臨床苯中毒病例實驗研究則顯示TOPOⅡα含量降低不僅與TOPOⅡα啟動子組蛋白H4乙?;健3K4甲基化水平降低及H3K9甲基化水平升高有關還與組蛋白H3乙?;浇档陀嘘P.進一步的臨床苯中毒病例研究提示TOPO Ⅱα含量下降與TOPO Ⅱα啟動子調控因子(SP1、ATF-2、SP3、NF-YA、NF-M、P53、C-MYB、C-J
7、UN、ICBP90)組蛋白甲基化及乙?;礁淖冇嘘P:SP1、ATF-2、SP3、NF-YA、NF-M、P53、C-MYB、ICBP90組蛋白H4、H3乙?;较陆? C-JUN組蛋白H4、H3乙?;綗o明顯改變;NF-YA、C-JUN組蛋白H3K4甲基化水平下降,SP1、ATF-2、SP3、NF-M、P53、C-MYB、ICBP90組蛋白H3K4甲基化水平無明顯改變;SP1、NF-M組蛋白H3K9甲基化水平升高,而ATF-2、SP
8、3、NF-YA、P53、C-MYB、C-JUN、ICBP90組蛋白H3K9甲基化水平無明顯改變. 6.臨床苯中毒病例TOPOⅡα啟動子各調控因子mRNA表達水平的改變:與正常對照組相比,mRNA表達水平降低的有SP1、NF-YA、C-MYB、NF-M及C-JUN, ATF-2、ICBP90mRNA表達水平不變而SP3、P53mRNA表達水平則升高. 7.氫醌(苯代謝產物)接觸不同時間后骨髓單個核細胞TOPOⅡα mRNA
9、水平呈動態(tài)下降,4h時mRNA水平下降開始出現(xiàn)統(tǒng)計學意義(P<0.01),ChIP后發(fā)現(xiàn)3.5h時TOPOⅡα啟動子己出現(xiàn)改變(組蛋白乙?;疕4水平). 結論:1.苯及其代謝物導致人骨髓單個核細胞TOPOⅡα的表達(蛋白含量、mRNA水平)及活性受抑,與所致的造血細胞損傷有關.2.TOPOⅡα表達下降的機制與TOPOⅡα啟動子及部分啟動子調控因子組蛋白H4、H3乙?;?組蛋白H3K4、H3K9甲基化水平改變有關.3.氫醌接觸
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- DNA拓撲結構與DNA拓撲異構酶的研究.pdf
- DNA拓撲異構酶Ⅰ在小細胞肺癌中的表達研究.pdf
- 基于DNA拓撲異構酶Ⅱ基因對側耳屬(Pleurotus)系統(tǒng)發(fā)育關系的研究.pdf
- DNA拓撲異構酶Ⅰ在小細胞肺癌細胞株中的表達與耐藥關系的研究.pdf
- 拓撲異構酶與卵巢癌預后及多藥耐藥關系的研究.pdf
- 小鼠神經(jīng)干細胞中DNA拓撲異構酶Ⅱ的表達.pdf
- 對聯(lián)三苯類拓撲異構酶抑制劑的合成及抗腫瘤活性研究.pdf
- 37539.dna特殊拓撲異構體和e.coli拓撲異構酶ⅲ的研究
- 玉米拓撲異構酶Ⅰ基因ZmTop1的克隆及其表達分析.pdf
- 非小細胞肺癌拓撲異構酶Ⅱα的表達及其與Ki67、p53的關系.pdf
- 脲原體拓撲異構酶基因突變與喹諾酮類耐藥的相關性研究.pdf
- 苯致SD大鼠造血組織DNA損傷與XPD基因表達及甲基化的關系.pdf
- Riccardin D靶向DNA拓撲異構酶Ⅱ的抗腫瘤作用研究.pdf
- 釕(Ⅱ)配合物的DNA鍵合及拓撲異構酶抑制研究.pdf
- 結核分枝桿菌DNA拓撲異構酶Ⅰ與DNA的相互作用研究.pdf
- 大腸桿菌拓撲異構酶Ⅳ的誘導表達及鑒定.pdf
- 拓撲異構酶Ⅰ抑制劑對膀胱腫瘤細胞抑制作用的機理研究.pdf
- 2苯基萘靶向拓撲異構酶抗腫瘤作用機制研究
- miR-155與骨髓造血細胞的關系研究.pdf
- DNA拓撲異構酶-Ⅱα對腫瘤干細胞在膠質母細胞瘤增殖機制中作用的研究.pdf
評論
0/150
提交評論