膜片鉗實驗技術在血竭顏面部鎮(zhèn)痛分子機制研究中的應用.pdf

1、對中藥和天然藥物進行有效成分研究和提取是中藥現代化進程中中藥藥理學研究的關鍵性問題，也是揭示中醫(yī)藥的科學本質、開發(fā)創(chuàng)新藥物的重要途徑之一。 血竭是我國的傳統名貴中藥之一，在防治心血管疾病、治療風濕疼痛癥、抗癌等方面開發(fā)利用潛力大。然而目前對血竭藥理作用機理的研究大多集中在其活血化瘀方面，為數不多的血竭鎮(zhèn)痛作用機理的研究也僅與其抗菌消炎止痛有關。但血竭能緩解神經性痛的實驗現象提示我們血竭的鎮(zhèn)痛作用機理可能還與其直接干預了痛覺信息的

2、傳入有關。由于血竭是一種中藥，化學成分復雜，從分子水平來解釋它的這種效應，理應闡明其藥效物質。為此，鑒于三叉神經節(jié)細胞膜上的電壓門控性鈉通道在頭面部疼痛發(fā)生機制中的重要作用，我們對血竭進行有效成分、有效部位(群)快速定量確定和在分子水平上分析其藥理機制的系統性實驗和計算機模擬研究，在系統分析研究結果的基礎上，提出有效成分定量化的確切定義及中藥有效成分研究的方法學，確定血竭干預頭面部痛覺信息中樞傳入的藥效物質，并將此研究作為中藥現代化中有

3、效成分確定和藥理機制深入分析的一個例證。 本文首先應用全細胞膜片鉗技術觀察了血竭對小鼠三叉神經節(jié)細胞河豚毒素敏感型和河豚毒素不敏感型兩類電壓門控性鈉通道電流的影響。結果，血竭對兩種鈉通道電流均有濃度依賴性的抑制作用，0.1％的血竭影響兩類鈉通道的激活和失活過程，并使TTX-R鈉電流I-V曲線峰值向右偏移，延緩其復活過程。表明血竭除抗炎鎮(zhèn)痛外，還通過調制TG細胞電壓門控性鈉通道，干預頭面部痛覺信息的中樞傳入產生鎮(zhèn)痛作用。

4、為確定血竭產生上述鎮(zhèn)痛效應的藥效物質基礎，采用化學方法將最有可能產生鎮(zhèn)痛效應的血竭黃酮部位提取分離，并應用膜片鉗技術觀察了血竭黃酮部位對小鼠TG細胞兩類鈉通道電流的影響，用Hodgkin-Huxley模型擬合血竭黃酮部位作用前后的河豚毒素敏感型鈉通道電流，進行參數估計。結果，0.1％血竭黃酮部位對兩類電壓門控性鈉通道電流均有濃度依賴地抑制作用，并影響鈉通道電流的失活和復活過程，而對其激活過程無明顯影響，表明上述抑制作用發(fā)生在鈉通道的失活

5、態(tài)和復活態(tài)。 采用化學方法進一步從血竭黃酮部位中提取分離五種化學單體成分：龍血素B、劍葉龍血素A、劍葉龍血素B、紫檀芪和黃烷，應用全細胞膜片鉗技術觀察了幾種主要單體化學成分對小鼠TG細胞兩類鈉通道電流的影響。結果，0.2mmol/L龍血素B對兩類電壓門控性鈉通道電流均有濃度依賴地抑制作用，并影響鈉通道電流的失活過程，而對其激活和復活過程無明顯影響，表明上述抑制作用發(fā)生在鈉通道的失活態(tài)而非激活態(tài)。而另一種單體成分劍葉龍血素B同樣能

6、可恢復性地抑制TG細胞鈉通道電流，只是抑制程度不及龍血素B；0.2mmol/L劍葉龍血素B影響鈉通道的激活和復活過程，而對失活過程無明顯影響，表明血竭總黃酮很可能是通過其所含的幾種單體成分分別作用于通道的不同動力學階段而表現出對鈉電流的較強抑制作用的。 總結上述實驗結果，建立中藥藥效物質的現代概念――有效成分的定量化定義和相應的研究策略，并據此將血竭、血竭黃酮部位及其各單體化學成分的藥理效應參數進行比較，發(fā)現0.1％血竭黃酮部位

7、與0.1％血竭的藥理效應參數有高度的一致性，從而確定血竭調制TG細胞鈉通道電流的有效部位為血竭黃酮部位；0.2mmol/L單體化學成分龍血素B、劍葉龍血素B與0.1％血竭的藥理效應參數有較高的一致性，從而確定龍血素B是血竭調制TG細胞電壓門控性鈉通道電流，產生頭面部鎮(zhèn)痛效應的主要有效成分，劍葉龍血素B為其輔助性成分。 本研究不僅有利于中藥血竭的進一步推廣，更將為其二次開發(fā)和現代化應用提供可靠的依據，并期能為現代中藥藥理學研究提供