革皮氏海參(Pearsonotheia graeffei)皂苷的制備與毒理學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、海參皂苷(holothurian glycosides),又稱海參素(holothurin),是從海參中提取的三萜皂苷類成分,具有抗真菌、抗病毒、細(xì)胞毒活性、抗腫瘤、溶血、免疫調(diào)節(jié)等廣泛的生理學(xué)和藥理學(xué)活性,但同時(shí)海參皂苷有較強(qiáng)的溶血性,導(dǎo)致海參皂苷應(yīng)用的安全性存在很大隱患,限制了海參皂苷臨床應(yīng)用的進(jìn)一步發(fā)展。本文以革皮氏海參(P.graeffei)為原料制備純化海參總皂苷,分離純化海參皂苷單體Holothurin A(HA)和Echi

2、noside A(EA),并進(jìn)行定量分析;對(duì)海參總皂苷的急性毒性、致突變性、對(duì)生殖細(xì)胞的遺傳毒性以及30天毒性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,對(duì)其安全性進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)。主要研究結(jié)果如下:
　　 海參總皂苷及海參皂苷單體HA和EA的制備。以革皮氏海參為原料,利用高效液相色譜儀對(duì)其純度進(jìn)行檢測(cè)。通過乙醇粗提取法得到海參總皂苷,測(cè)得海參總皂苷的純度為26％;利用大孔樹脂柱層析法對(duì)海參總皂苷進(jìn)行純化,得到海參總皂苷的純度為48％;利用正相硅膠柱層析法

3、進(jìn)行進(jìn)一步純化,得到海參總皂苷純度為68％;經(jīng)反相硅膠柱層析法分離得到海參皂苷單體HA和EA,純度分別為82.6％和91.4％。;利用高效液相色譜法分離純化兩種單體后,純度分別為92.3％和95.4％。
　　 采用灌胃法一次性給予小鼠不同劑量的海參皂苷,24h后觀察小鼠死亡情況,根據(jù)Horn法,確定海參皂苷對(duì)小鼠的半數(shù)致死量為雌性為1.10g/kg,雄性為1.08g/kg;灌胃不同劑量海參皂苷14d后,海參皂苷各劑量組與正常對(duì)照

4、組相比谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶、外周血象各指標(biāo)沒有顯著變化,表明該劑量的海參皂苷對(duì)小鼠肝臟有無(wú)明顯的損傷作用,對(duì)外周血成分無(wú)影響。
　　 海參皂苷無(wú)致突變作用。通過30小時(shí)受試法灌胃小鼠不同劑量的海參皂苷,小鼠處死后取骨髓細(xì)胞制片,統(tǒng)計(jì)各組小鼠骨髓細(xì)胞的微核率,結(jié)果顯示海參皂苷各劑量組小鼠骨髓細(xì)胞與正常對(duì)照組均無(wú)顯著性差異,表明海參皂苷的灌胃劑量在138～550mg/kg之間對(duì)機(jī)體無(wú)致突變的作用。
　　 海參皂苷無(wú)生殖細(xì)胞遺傳毒

5、性。連續(xù)5天灌胃不同劑量海參皂苷,35d后處死小鼠,制作小鼠精子涂片并進(jìn)行觀察,統(tǒng)計(jì)各組小鼠的精子畸形率,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明海參皂苷各劑量組的精子畸形率與正常對(duì)照組均無(wú)顯著性差異,說明海參皂苷的灌胃劑量在138～550mg/kg之間對(duì)機(jī)體無(wú)生殖細(xì)胞遺傳毒性。
　　 大鼠連續(xù)灌胃不同劑量海參皂苷(25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg)30天,結(jié)果表明長(zhǎng)期服用海參皂苷不會(huì)對(duì)大鼠體重造成明顯影響;海參皂苷對(duì)血液中的紅細(xì)胞、

6、血紅蛋白、尿素氮、肌酐、尿酸、甘油三脂、總膽固醇以及低密度脂蛋白膽固醇的含量都無(wú)顯著影響,對(duì)尿液中的尿素氮、肌酐、尿素等的含量也無(wú)顯著影響;海參皂苷可以顯著增加雄性大鼠白細(xì)胞與血小板的數(shù)量,說明海參皂苷可以增加白細(xì)胞與血小板的增殖能力;海參皂苷可以顯著提高血清中高密度脂蛋白膽固醇的含量,說明海參皂苷可以促進(jìn)脂質(zhì)代謝,減緩脂肪積累;通過組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),海參皂苷對(duì)肝臟、心臟、腎臟、肺、胃等組織無(wú)毒性作用,但會(huì)引起睪丸、卵巢的損傷。