TRAIL及其受體在大腸癌的表達(dá)研究.pdf

1、本研究擬采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法(SP法)和流式細(xì)胞分析方法檢測(cè)大腸癌組織和正常組織中腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-relatedapoptosisinducingligand，TRAIL)、DR4和DR5的表達(dá)情況，分析其表達(dá)與大腸癌生物學(xué)行為之間的關(guān)系，從而為大腸癌治療提供依據(jù)。 研究方法： 1.病例：選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2003年1月～2004年8月外科手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷確診的大腸

2、癌標(biāo)本41例。按照2000年WHO新的大腸腫瘤組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分類，高分化腺癌(Ⅰ級(jí))10例，中度分化腺癌(Ⅱ級(jí))15例，低分化腺癌(Ⅲ級(jí))16例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者19例。另取9例癌旁組織，經(jīng)病理證實(shí)為正常大腸粘膜的組織作為對(duì)照。 2.免疫組化染色及結(jié)果判定：采用免疫組化SP法對(duì)大腸癌和癌旁正常組織中TRAIL、DR4和DR5的表達(dá)進(jìn)行研究。三者表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，陽性信號(hào)呈棕黃色顆粒狀。根據(jù)染色深淺分為

3、三個(gè)等級(jí)，分別記分1，2，3。再根據(jù)染色范圍記分1，2，3。兩項(xiàng)記分相加，＜3分為陰性表達(dá)，≥3分為陽性表達(dá)。分別計(jì)算大腸癌組織和正常組織的陽性表達(dá)率。 3.流式細(xì)胞分析。石蠟切片，利用網(wǎng)搓法進(jìn)行單細(xì)胞懸液制備。熒光標(biāo)記細(xì)胞后，采用美國BeckmanCoulter公司生產(chǎn)的Epics-XLⅡ型流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)，應(yīng)用Expo32ADC進(jìn)行免疫熒光數(shù)據(jù)分析。以熒光指數(shù)(FI)表示蛋白表達(dá)的相對(duì)含量。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用S

4、PSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行x2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、直線相關(guān)分析。 研究結(jié)果： 1.TRAIL蛋白免疫組化染色定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，癌組織中陽性表達(dá)率為24.4％，在正常組織中陽性表達(dá)率為66.7％，流式細(xì)胞分析該蛋白表達(dá)量，癌組織平均熒光指數(shù)為0.92±0.09，正常組織平均熒光指數(shù)為1.05±0.12。癌組織中TRAIL蛋白在免疫組化中的陽性表達(dá)率和流式細(xì)胞分析的蛋白表達(dá)量均低于正常組織(P＜0.05)。癌組織中

5、，TRAIL蛋白表達(dá)隨著分化程度的降低呈逐步下降趨勢(shì)(P＜0.05)；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 2.DR4蛋白免疫組化染色定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，癌組織中陽性表達(dá)率為65.85％，在正常組織中陽性表達(dá)率為22.2％，流式細(xì)胞分析該蛋白表達(dá)量，癌組織平均熒光指數(shù)為1.17±0.11，正常組織平均熒光指數(shù)為1.00±0.13。癌組織中DR4蛋白在免疫組化中的陽性表達(dá)率和流式細(xì)胞分析的蛋白

6、表達(dá)量均高于正常組織(P＜0.05)。癌組織中，DR4蛋白表達(dá)與分化程度的高低無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 3.DR5蛋白免疫組化染色定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，癌組織中陽性表達(dá)率為73.17％，在正常組織中陽性表達(dá)率為22.2％，流式細(xì)胞分析該蛋白表達(dá)量，癌組織平均熒光指數(shù)為1.12±0.12，正常組織平均熒光指數(shù)為0.98±0.12。癌組織中DR5蛋白在免疫組

7、化中的陽性表達(dá)率和流式細(xì)胞分析的蛋白表達(dá)量均高于正常組織(P＜0.05)。癌組織中，DR5蛋白表達(dá)與分化程度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05)。 4.TRAIL與DR4蛋白表達(dá)量進(jìn)行直線相關(guān)分析，r=0.33，P＞0.05。 5.TRAIL與DR5蛋白表達(dá)量進(jìn)行直線相關(guān)分析，r=0.05，P＞0.05。6DR4與DR5蛋白表達(dá)量進(jìn)行直線相關(guān)分析，r=0.49，P＞0.

8、05。 研究結(jié)論： 1.TRAIL在正常組織的表達(dá)明顯高于大腸癌組織，在不同組織學(xué)分級(jí)的癌組織中TRAIL蛋白的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的癌組織中TRAIL的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.DR4在大腸癌組織的表達(dá)明顯高于正常組織，在不同組織學(xué)分級(jí)的癌組織中DR4蛋白的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的癌組織中DR4的表達(dá)亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.DR5在大腸癌組織的表達(dá)明顯高于正常組織，在不同組織學(xué)分級(jí)的癌