泡球蚴囊液對(duì)原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞增殖影響的初步研究.pdf

1、目的: 1.成功建立大鼠肝細(xì)胞的無血清原代培養(yǎng)體系。2.探討泡球蚴囊液對(duì)體外無血清原代培養(yǎng)大鼠肝臟細(xì)胞增殖的影響。 方法:1.以Wistar大鼠作肝細(xì)胞供者，采用膠原酶肝臟原位灌流消化法分離大鼠肝細(xì)胞，并以1×106的密度接種于Ⅰ型膠原鋪底的直徑35mm的培養(yǎng)皿，分別采用血清和無血清培養(yǎng)24h和48h，并在肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)和肝細(xì)胞增殖指數(shù)上對(duì)兩者進(jìn)行比較，建立大鼠肝細(xì)胞無血清原代培養(yǎng)體系。2.大鼠肝細(xì)胞無血清培養(yǎng)體系建立后，分別用無

2、菌的泡球蚴囊液及無血清培養(yǎng)液與大鼠肝細(xì)胞共培養(yǎng)24h和48h，培養(yǎng)期間用熒光倒置顯微鏡觀察大鼠肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，用流式細(xì)胞儀測(cè)定大鼠肝細(xì)胞的細(xì)胞周期；同時(shí)將分離所得的大鼠肝細(xì)胞以1×105的密度接種于Ⅰ型膠原鋪底的96孔培養(yǎng)板，無血清培養(yǎng)后，采用MTT法檢測(cè)泡球蚴囊液對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞是否有毒性作用。 結(jié)果: 1.大鼠肝細(xì)胞無血清培養(yǎng)體系的建立：大鼠肝細(xì)胞活細(xì)胞分離存活率＞90％，與血清原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞相比，無血清原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞

3、生長(zhǎng)良好，24h和48h肝細(xì)胞增殖指數(shù)略微增加，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2.與對(duì)照組相比，與泡球蚴囊液共培養(yǎng)的肝細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好；MTT法顯示泡球蚴囊液對(duì)肝細(xì)胞無細(xì)胞毒性作用；泡球蚴囊液處理24小時(shí)后肝細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)由82.0％±6.0％降至49.35％±4.0％；處理48小時(shí)后肝細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)由67％±10％降低至27.61％±6％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論: 1.成功建立大鼠肝細(xì)胞無血清