低氧誘導(dǎo)因子1α、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在神經(jīng)干細(xì)胞缺氧、復(fù)氧損傷的作用.pdf

1、目的：探討低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxiainduciblefactotlα，HIF-1α)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)與神經(jīng)干細(xì)胞缺氧、復(fù)氧損傷的關(guān)系。 方法：取出生24h以內(nèi)的Wistar大鼠，無菌條件下取出鼠腦，剝離腦膜，分離海馬組織，Hank's液漂洗，移至預(yù)先加入適量基礎(chǔ)培養(yǎng)液(DMEM/F12)的小瓶中，剪碎，吹打成細(xì)胞懸液，濾除組織塊，調(diào)至密度為5×10

2、5/ml后轉(zhuǎn)入25ml培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。7-8d傳代一次。按試劑盒提供的方法進(jìn)行nestin熒光染色。將實(shí)驗(yàn)組分兩組(缺氧組和缺氧-復(fù)氧兩組)，以終濃度為150uM-CoCl2的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，制備模擬缺氧模型。缺氧4h后去除CoCl2形成復(fù)氧模型(組)。測(cè)定兩組NSCs的增殖情況；RT-PCR法測(cè)HIF-1αmRNA、iNOSmRNA水平；DNA片段法測(cè)定NSCs的凋亡。 結(jié)果：隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，HIF-1αmRNA表達(dá)增加，在