黃瓜α-半乳糖苷酶基因克隆及表達(dá)分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、黃瓜以水蘇糖作為體內(nèi)同化物的主要運(yùn)輸形式，其果實(shí)中卻只含有蔗糖、葡萄糖和果糖。經(jīng)韌皮部遠(yuǎn)距離運(yùn)輸而來的水蘇糖到達(dá)庫器官后，如何卸載并轉(zhuǎn)化為蔗糖這一生理學(xué)過程一直不明。在組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞水平上研究水蘇糖分解為蔗糖過程中的關(guān)鍵酶—α-半乳糖苷酶(EC3.2.1.22)的時(shí)空表達(dá)模式可為解決該問題提供重要線索。而要進(jìn)行這些研究，就必須首先獲得黃瓜α-半乳糖苷酶的基因序列，才能根據(jù)這些序列，合成探針、引物或設(shè)計(jì)RNA干擾開展后續(xù)工作。

2、 為此，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)其他物種中α-半乳糖苷酶序列的保守區(qū)段設(shè)計(jì)引物，綜合運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和快速擴(kuò)增cDNA末端(RACE)等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)并克隆了4種黃瓜α-半乳糖苷酶的全長cDNA序列，分別命名為：黃瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅰ(DQ320569)、黃瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅱ(DQ361277)、黃瓜堿性α-半乳糖苷酶Ⅰ(DQ157703)和黃瓜堿性α-半乳糖苷酶Ⅱ(DQ395330)。這項(xiàng)工作使黃瓜成為迄今為止發(fā)現(xiàn)并克隆α

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