中藥復(fù)方JH-07的HPLC指紋圖譜及抗腫瘤活性研究.pdf

1、復(fù)方JH-07是我室自行研制的中藥復(fù)方，由黃連、吳茱萸、藤黃的醇提物按質(zhì)量比1.5:1.5：1復(fù)配而成，經(jīng)初步藥理學(xué)試驗(yàn)具有一定抗腫瘤活性。中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)是當(dāng)前中醫(yī)藥領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題，也是中藥現(xiàn)代化的重要研究課題，其中指紋圖譜是公認(rèn)的解決中藥質(zhì)量控制的方法。本課題選擇HPLC指紋圖譜分析方法為主，對(duì)復(fù)方進(jìn)行質(zhì)量控制研究；選擇體內(nèi)、外抗腫瘤作用作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。主要內(nèi)容如下： 采用HPLC法對(duì)各藥材醇提物中指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測定，從而起到

2、在源頭上控制復(fù)方質(zhì)量的作用。黃連中小檗堿含量為74.5mg·g-1，吳茱萸中吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量分別為78.6及46.5mg·g-1，藤黃中藤黃酸含量為26.2 mg·g-1。 采用HPLC指紋圖譜對(duì)復(fù)方JH-07的質(zhì)量進(jìn)行控制。經(jīng)過多次摸索，確定洗脫系統(tǒng)：水-乙腈-50mmol·L-1KH2PO4水溶液(磷酸調(diào)PH到3)，線性梯度洗脫；檢測波長：283nm；柱溫：25℃；流速：1.0ml·min-1。建立了復(fù)方JH-07指

3、紋圖譜分析方法。選出各批次復(fù)方JH-07的20個(gè)色譜峰作為共有指紋峰，比較了保留時(shí)間、峰面積、峰面積百分比及指標(biāo)性成分含量的一致性。發(fā)現(xiàn)這些指紋峰特征性強(qiáng)、系統(tǒng)性好，可以很好的反映復(fù)方JH-07質(zhì)量優(yōu)劣。 生物活性實(shí)驗(yàn)部分采用體外、體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)方法。體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測JH-07對(duì)體外培養(yǎng)的人食管癌細(xì)胞EC9706，人白血病細(xì)胞K562敏感株及耐藥株，人成纖維瘤細(xì)胞L929，人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞TJ-905的生長

4、抑制作用。體外JH-07可以顯著抑制人白血病細(xì)胞K562敏感株和耐藥株，以及人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞TJ-905的生長，IC50分別為15.40μg·mL-1、9.55μg·mL-1、15.02μg·mL-1。 體內(nèi)JH-07對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠實(shí)體瘤的抑瘤實(shí)驗(yàn)采用常規(guī)抗腫瘤藥物實(shí)驗(yàn)方法，用昆明種小白鼠，雌雄各半，設(shè)立空白對(duì)照組、順鉑(0.005g·kg-1)及3個(gè)劑量JH-07給藥組，每組10只；比較各組瘤重、肝、脾、胸腺指數(shù)，計(jì)算抑瘤