致病性牛源大腸桿菌毒力基因分子流行病學(xué)調(diào)查和耐藥突變選擇窗的應(yīng)用.pdf

1、致病性大腸桿菌是危害畜禽健康的常見(jiàn)病原菌之一，可引發(fā)犢牛的腹瀉和泌乳牛的乳腺炎及子宮炎等疾病。因其攜帶的毒力因子和血清型復(fù)雜多樣，且存在地區(qū)差異，現(xiàn)在還沒(méi)有較為理想的免疫疫苗，臨床上主要應(yīng)用抗菌藥物進(jìn)行預(yù)防和治療。然而，因抗菌藥物的大量使用和濫用，臨床分離的菌株的耐藥性發(fā)展迅速，對(duì)預(yù)防和控制動(dòng)物疾病構(gòu)成嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。
　　本試驗(yàn)收集2015-2016年我國(guó)部分地區(qū)規(guī)?；膛?chǎng)病料112份，經(jīng)鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)、持家基因phoA的PCR擴(kuò)增

2、以及動(dòng)物試驗(yàn)獲得致病性牛源大腸桿菌84株。對(duì)其進(jìn)行16種毒力基因的PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示，攜帶毒力基因的致病性大腸桿菌有60株，檢出率達(dá)71.43％。其中F41的檢出率最高，占毒力基因陽(yáng)性菌株的31.67％，其次是CS31A(28.33％)，F(xiàn)17(26.67％)，irp2(18.33％)，LT和hlyA檢出率最低，僅為1.67％。多種毒力基因組合以F41+K99為主，不同地區(qū)分布的毒力基因類(lèi)型不同。
　　采用藥敏紙片擴(kuò)散法檢測(cè)84

3、株致病性牛源大腸桿菌對(duì)20種抗菌藥物的敏感性和耐藥性，結(jié)果顯示，從牛分離出的致病性大腸桿菌對(duì)阿米卡星、多粘菌素B和氨曲南表現(xiàn)為相對(duì)敏感，敏感率為66.67％、60.71％和60.71％;而對(duì)阿莫西林、氨芐西林和土霉素表現(xiàn)為高度耐藥，耐藥率為91.67％、89.29％和88.10％。所有分離菌株表現(xiàn)出16種耐藥譜系，主要以12耐、13耐和17耐為主，不同地區(qū)耐藥性和耐藥譜系不同。分離菌株對(duì)16種藥物主要變現(xiàn)出15種耐藥表型，其中阿莫西林-

4、頭孢氨芐-甲氧芐啶-鏈霉素-多西環(huán)素-土霉素-環(huán)丙沙星為優(yōu)勢(shì)耐藥表型。
　　采用微量肉湯稀釋法和棋盤(pán)法測(cè)定頭孢噻呋與甲氧芐啶單獨(dú)用藥及聯(lián)合用藥后對(duì)致病性牛源大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)，計(jì)算部分抑菌濃度(FIC)指數(shù)，判斷兩藥聯(lián)用后的相互作用;采用瓊脂二倍稀釋法測(cè)定兩藥單用及聯(lián)合后的防突變濃度(MPC)，計(jì)算選擇指數(shù)SI(MPC/MIC)。結(jié)果表明:頭孢噻呋的MIC為0.5-4μg/mL，甲氧芐啶的MIC為0.5-256μg/

5、mL，兩者聯(lián)用后的FIC指數(shù)為0.25-1，表明兩藥聯(lián)用呈協(xié)同或相加作用。頭孢噻呋單用的MPC為64-512μg/mL，SI為64-256;與甲氧芐啶聯(lián)合使用后其MPC為16-32μg/mL，SI下降為8-64;甲氧芐啶單用時(shí)的MPC為512μg/mL，SI為1-4;與頭孢噻呋聯(lián)用后，其MPC和SI未發(fā)生改變，說(shuō)明頭孢噻呋與甲氧芐啶聯(lián)用不能降低甲氧芐啶單用的防突變濃度，但可降低頭孢噻呋單用對(duì)致病性牛源大腸桿菌的防突變濃度，縮小耐藥突變選