VEGF、CD31在慢性實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠及非糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注模型中的表達(dá).pdf

1、目的：1、建立慢性實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠(CEDR)和非糖尿病大鼠(NDR)局灶性腦缺血再灌注(CI/R)模型，并分析比較影響模型制備成功的因素。2、觀測VEGF、CD31在CEDR及NDR局灶性CI/R模型中的表達(dá)，并分析在相同CI/R損傷情況下，VEGF、CD31在兩類大鼠表達(dá)不同的原因。 方法： 1.慢性實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠模型的制備：140只體質(zhì)量為180～220g的雄性Wister大鼠禁食12小時(shí)后，于腹腔內(nèi)一次性注射鏈

2、脲佐菌素(STZ)55mg/kg，普通飲食飼養(yǎng)42～47天，在飼養(yǎng)過程中每7天飲水中給予2次慶大霉素(6.4×104U/只)。注射鏈脲佐菌素后每周斷尾取血測定1次血糖值及體質(zhì)量，及時(shí)淘汰不成模大鼠。并將成模后體質(zhì)量為240～310g、血糖水平在13.5～25.6mmol/L的糖尿病大鼠(diabeticrat,DR)進(jìn)一步制作CI/R模型。 2.腦缺血再灌注模型的制備：將成模的體質(zhì)量為240～310g的CEDR和NDR各90只，

3、按照體重、血糖值分別隨機(jī)分為空白對照組、假手術(shù)組、腦缺血再灌注1h、3h、6h、12h、24h、72h、168h各9組，每組大鼠10只。采用Longa線栓法分別制作各組DR、NDR局灶性CI/R模型，并用Longa神經(jīng)功能評分標(biāo)準(zhǔn)，比較兩類大鼠模型制備成功率，分析兩類大鼠模型制備失敗及死亡原因。 3.VEGF、CD31表達(dá)的測定：DR和NDR各9組分別制作CI/R模型后，分別斷頭取腦，用組織切片機(jī)自前腦額極起切取6片冠狀切片，層

4、厚2mm,取第4片腦切片置于10％甲醛固定液中固定，石蠟切片，采用免疫組化的方法染色，在OLYMPUS光學(xué)顯微鏡下分別觀察DR和NDR空白對照組、假手術(shù)組、腦缺血再灌注后1h、6h、12h、48h、72h、168h時(shí)VEGF、CD31在缺血中心區(qū)、缺血半暗帶區(qū)表達(dá)的情況。每張切片隨意取5個(gè)視野，測定每個(gè)視野內(nèi)陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)。 結(jié)論： 1.在制備慢性實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠局灶性CI/R模型過程時(shí)，初始大鼠體重控制在180～220

5、g較為合適，在糖尿病病程第35天時(shí)，測量大鼠血糖、體質(zhì)量：把血糖明顯升高(＞13.5mmol/L并＜25.6mmol/L)且體質(zhì)量在220g～300g者，定為消瘦鼠，表明糖尿病模型制備成功，并可進(jìn)一步制備糖尿病大鼠CI/R模型。 2.在相同腦缺血再灌注條件下，DR腦組織損傷較NDR重，表現(xiàn)為DR：神經(jīng)功能缺損癥狀重、神經(jīng)功能評分高于NDR腦缺血再灌注組、腦梗死體積大。 3.腦缺血再灌注后DR再灌注后各時(shí)間點(diǎn)VEGF缺血中