TNF配體相關(guān)分子 1A在病毒性心肌炎中的表達(dá)及黃芪甲甙干預(yù)研究.pdf

1、第一部分：TL1A 在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表達(dá) 目的:TNF 配體相關(guān)分子1A（TL1A）是一種含251 個(gè)氨基酸的Ⅱ型跨膜蛋白，屬于TNF 超家族的一個(gè)新成員。有研究發(fā)現(xiàn)TNF 參與病毒性心肌炎（VMC）的發(fā)生發(fā)展。而作為TNF 超家族的成員，TL1A 亦參與許多炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展過程。本實(shí)驗(yàn)旨在研究TL1A 在病毒性心肌炎小鼠心肌中表達(dá)的動(dòng)力學(xué)特征，探討其在病毒性心肌炎發(fā)病學(xué)中的意義。 方法:取Balb/c小鼠8

2、0 只，分為實(shí)驗(yàn)組70 只，對(duì)照組10 只。實(shí)驗(yàn)組小鼠每只腹腔注射0.1mL內(nèi)含1×102TCID50 CVBB3 的Eagle’s培養(yǎng)液，對(duì)照組小鼠每只腹腔注射不含病毒的Eagle’s培養(yǎng)液0.1mL。實(shí)驗(yàn)組小鼠分別于接種病毒后3、7、15、30d隨機(jī)各取10 只處死，對(duì)照組小鼠在接種后30 天處死作為總體對(duì)照。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及免疫組化等方法半定量檢測(cè)VMC小鼠不同時(shí)點(diǎn)心肌TL1A基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平。

3、 結(jié)果:VMC小鼠在接種病毒后3d 心肌TL1A mRNA 及蛋白表達(dá)水平升高，7d 表達(dá)水平最高，此后其表達(dá)逐漸下降，但30d 仍維持在一個(gè)較高水平,各時(shí)點(diǎn)TL1A mRNA 及蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比，差異均有顯著性。 結(jié)論:CVB3病毒感染可引起TL1A表達(dá)上調(diào)，TL1A表達(dá)增加可能在CVB3病毒性心肌炎發(fā)病機(jī)制中起重要作用。 第二部分：黃芪甲甙對(duì)病毒性心肌炎小鼠心肌中TL1A 表達(dá)的影響 目的:黃芪甲甙

4、是中藥黃芪有效成份皂甙的單體成份，對(duì)急、慢性病毒性心肌炎與病毒性擴(kuò)張型心肌病均有明顯的保護(hù)和治療作用。本實(shí)驗(yàn)研究黃芪甲甙干預(yù)的病毒性心肌炎小鼠中TL1A 表達(dá)的影響，探討黃芪甲甙治療病毒性心肌炎的作用機(jī)制。 方法:取Balb/c小鼠100 只，隨機(jī)分成6 組。非感染小鼠腹腔無菌注射不含病毒的Eagle’s培養(yǎng)液0.1mL，分為正常對(duì)照組（A組，10 只，以羧甲基纖維素鈉0.1mL灌胃7d）、高劑量對(duì)照組（B組，10 只，9％黃芪

5、甲甙0.1mL灌胃7d）；余80 只小鼠以腹腔無菌注射0.1mL內(nèi)含1×102TCID50 CVB3 的Eagle’s培養(yǎng)液制作VMC模型，VMC小鼠隨機(jī)分為心肌炎對(duì)照組和低、中、高劑量干預(yù)組，分別以生理鹽水、1％、3％、9％黃芪甲甙（分別為0.07、0.2、0.6g/kg.d）0.1mL灌胃7d（分別為C、D、E、F組，每組20 只）。14d后處死全部小鼠并取其心臟。采用RT-PCR及免疫組化分別檢測(cè)心肌TL1A mRNA及蛋白表達(dá)水

6、平。 結(jié)果:正常對(duì)照組和高劑量對(duì)照組無小鼠死亡,然而心肌炎對(duì)照組有大量小鼠死亡，死亡率為45％（9/20），低、中、高劑量干預(yù)組小鼠死亡率分別為30％（6/20）、25％（5/20）、10％（2/20），高劑量干預(yù)組小鼠死亡率較心肌炎對(duì)照組明顯降低，而低、中劑量干預(yù)組小鼠死亡率與心肌炎對(duì)照組比較，差異無顯著性；正常對(duì)照組和高劑量對(duì)照組心肌未見任何病理改變，然而兩組心肌中均有一定量的TL1A mRNA 及蛋白表達(dá)，兩組比較，差異無