尼古丁對子宮內(nèi)膜異位癥腹腔微環(huán)境影響的初步實驗研究.pdf

1、目的： 流行病學(xué)研究提示，吸煙能降低子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病。既往研究表明，尼古丁能抑制雌激素合成酶芳香化酶的活性，然而吸煙婦女血雌激素濃度并沒有降低到內(nèi)異癥臨床藥物治療所達到的近似絕經(jīng)期的水平，因此這不能完全解釋吸煙對內(nèi)異癥發(fā)病的影響，可能還存在其他的潛在機制。本研究通過體外實驗，觀察尼古丁對內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞增殖的影響，尼古丁和/或雌激素對內(nèi)異癥患者腹腔巨噬細胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞分別培養(yǎng)和共同培養(yǎng)分泌炎性細胞因子TNF-

2、α和IL-8的影響以及對煙堿受體和雌激素受體表達的影響，從而探討尼古丁對內(nèi)異癥的腹腔炎性微環(huán)境的影響，初步探討吸煙降低內(nèi)異癥發(fā)病的可能機制。 材料與方法： 1．經(jīng)過本院倫理委員會討論和病人知情同意后，收集子宮內(nèi)膜異位癥患者(主要是卵巢內(nèi)膜樣囊腫患者)的腹腔液分離培養(yǎng)腹腔巨噬細胞；收集子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位子宮內(nèi)膜組織分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞：兩種細胞單獨培養(yǎng)與共培養(yǎng)，并用免疫細胞化學(xué)鑒定；用MTT法檢測不同濃度尼古丁對

3、子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞生長的影響； 2．在腹腔巨噬細胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的培養(yǎng)液中，加入不同處理因素(不同濃度的尼古丁，雌激素，以及尼古丁和雌激素共同作用)，再加入脂多糖刺激，收集不同時間點(6h，12h，24h，48h，72h)的細胞培養(yǎng)上清液，用酶聯(lián)免疫法測定TNF-α和IL-8的濃度； 3．用免疫細胞化學(xué)法鑒定，原代培養(yǎng)的腹腔巨噬細胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的煙堿受體α7亞型(α7 nAChR)和雌激素受體α(ERα)的細胞定

4、位。 原代培養(yǎng)的腹腔巨噬細胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞中，加入尼古丁、雌激素，作用24h后，提取蛋白，用Western Bloaing檢測α7 nACR和ERα表達的改變。 結(jié)果： 1．尼古丁對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞增殖沒有明顯影響； 2．尼古丁對腹腔巨噬細胞分泌TNF-α和IL-8有抑制作用，雌激素存在時，這種抑制作用仍然存在； 3．尼古丁對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞分泌TNF-α有抑制作用，對IL-8分泌沒有明顯影響

5、； 4．尼古丁對腹腔巨噬細胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)分泌TNF-α和IL-8有抑制作用，雌激素存在時，這種抑制作用仍然存在； 5．腹腔巨噬細胞和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞具有α7 nAChR和ERα的表達，分別定位于細胞膜和細胞核； 6．尼古丁隨濃度升高能促進子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞α7 nAChR和ERα的表達，與雌激素共同作用時，兩種受體表達降低； 7．尼古丁能促進巨噬細胞α7 nAChR的表達，而抑制ERα的表達