泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方對糖尿病腎病大鼠腎臟的治療作用及對腎組織Nephrin mRNA表達的影響.pdf

1、目的:本研究通過高糖高脂飼料加小劑量鏈脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病腎病(DN)大鼠模型，并應(yīng)用泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方對模型進行干預(yù)性治療，通過觀察大鼠24小時尿蛋白定量、血清總白蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)等生化指標(biāo)以及腎組織Nephrin mRNA的表達，探討泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方對糖尿病腎病的治療作用及可能機制，從而為臨床治療糖尿病

2、腎病提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:選用清潔級健康雄性SD大鼠85只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，測尿蛋白和血糖均陰性，然后隨機取出15只為正常組對照，其余70只給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。12周后給予腹腔注射STZ35mg/kg，正常組給予相應(yīng)體積的枸櫞酸緩沖液腹腔注射。72h后測血糖，隨機血糖≥16.7mmol/L視為糖尿病造模成功。造模成功的大鼠隨機分為四組，分別為:模型組(MG)、中藥治療組(ZYG)、西藥治療組(XYG)、中藥

3、+西藥治療組(JYG)，除模型組外，各治療組分別給予相應(yīng)的藥物灌胃，每日1次，正常組和模型組予相應(yīng)的生理鹽水，每日灌胃1次，共16周。于給藥后第4周(4W)、8W、12W末大鼠尾靜脈取血測血糖，留24小時尿用尿蛋白試紙檢測尿蛋白。治療16周以后，留24小時尿，記錄尿量，離心尿液取上清液留用24小時尿蛋白定量的測定，使用水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血，離心取大鼠血清，測量大鼠血清的血清TP、ALB、Scr、BUN、TG、TC等生化指標(biāo)，摘

4、取右腎并稱重量，取腎臟組織用于光鏡、電鏡、免疫組化和Real-time PCR的觀察。
　　結(jié)果:
　　1.實驗大鼠一般情況的比較正常大鼠飲食正常，尿量正常，肌肉豐滿，毛發(fā)有光澤，精神良好，反應(yīng)靈敏。模型組大鼠均出現(xiàn)多飲、多食、多尿、身體消瘦，毛發(fā)脫落，行動遲緩等癥狀，部分大鼠隨時間的推移出現(xiàn)半身不遂、白內(nèi)障等;各治療組大鼠的癥狀都出現(xiàn)不同程度的緩解。
　　造模后大鼠死亡2只，1只血糖未達標(biāo)剔除。在給藥過程中，模型組死

5、亡4只，中藥組死亡1只，2只血糖自愈剔除，西藥組死亡2只，1只血糖自愈剔除，中藥加西藥聯(lián)合治療組1只血糖自愈剔除。
　　2.各組間大鼠體重，右腎重，肥大指數(shù)（肥大指數(shù)=右腎重/體重）的比較模型組和各治療組的體重與正常組相比均減輕（P＜0.05）;模型組和各治療組間相比無差別（P＞0.05）。正常組、模型組、治療組相比較，大鼠右腎重?zé)o明顯差異（P＞0.05）。模型組和各治療組的肥大指數(shù)與正常組相比均升高(P＜0.05);各治療組和模

6、型組相比無差別（P＞0.05）。
　　3.24小時尿蛋白定量的比較與正常組比較，各治療組和模型組24小時尿蛋白定量顯著升高（P＜0.05）;與模型組比，各治療組明顯降低(P＜0.05）;與中藥+西藥組相比，中藥組、西藥組升高（P＜0.05）;中藥組和西藥組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P≥0.05)。
　　4.各組間糖化血紅蛋白的比較與正常組相比，各治療組和模型組的糖化血紅蛋白均升高（P＜0.05）;與中藥+西藥組、中藥組相比，西藥

7、組和模型組均升高(P＜0.05）;中藥組與中藥+西藥組相比無明顯差異（P＞0.05）;西藥組與模型組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.各生化指標(biāo)的比較各治療組和模型組的TP、ALB與正常組相比均降低(P＜0.05），而TG、TC明顯升高（P＜0.05）;各治療組的TP、ALB與模型組比明顯升高（P＜0.05），而TG、TC明顯降低(P＜0.05）;與中藥+西藥組相比，中藥組和西藥組的TP、ALB降低（P＜0.05），TG、

8、TC升高（P＜0.05）;中藥組和西藥組相比TP、ALB、TG、TC無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。
　　正常組、模型組、各治療組的Scr、BUN相比較無明顯差異（P＞0.05）。
　　6.腎臟組織病理形態(tài)的觀察
　　6.1 光鏡下的觀察顯示:
　　正常組大鼠的腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見到腎小球的肥大，腎小球毛細血管基底膜未見增厚，系膜細胞和其基質(zhì)無明顯改變。模型組大鼠可見腎小球肥大，腎小球毛細血管

9、基底膜增厚。各治療組腎小球均有不同程度的病理改變。
　　6.2 電鏡下的觀察顯示:
　　正常組大鼠的腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球的基底膜均勻無增厚，足突均勻分布，模型組可見腎小球毛細血管基底膜增厚，部分增生，足突廣泛融合。各治療組的毛細血管基底膜出現(xiàn)不同程度的增厚，足突部分融合。
　　6.3 免疫組化染色法檢測腎組織Nephrin的表達:
　　Nephrin在正常組、各治療組均有表達，表達部位為腎小球足細胞裂孔膜處，

10、模型組表達不明顯。與正常組相比，各造模組中的Nephrin表達明顯減少（P＜0.05）;與模型組相比，各治療組中的Nephrin表達較強(P＜0.05);各治療組之間相比，中藥+西藥組的表達最強(P＜0.05）;中藥組和西藥組均有表達，兩組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。
　　7.腎組織中Nephrin mRNA的表達情況統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示:與正常組相比較，模型組、中藥+西藥組、中藥組、西藥組大鼠腎組織中Nephrin mR

11、NA的表達減弱(P＜0.05);與模型組相比，中藥+西藥組、中藥組、西藥組大鼠腎組織中Nephrin mRNA的表達上調(diào)(P＜0.05);與中藥+西藥組相比，中藥組和西藥組大鼠組織中NephrinmRNA的表達下調(diào)(P＜0.05）;中藥組、西藥組相比較（P＞0.05）無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方中藥可降低糖尿病腎病大鼠24小時尿蛋白定量，升高血清中的TP、ALB，降低TG、TC，降低糖化血紅蛋白，