mRNA定量分析檢測Notch信號傳導(dǎo)通路在人原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá).pdf

1、目的:Notch信號作為一種在進(jìn)化中高度保守的反映細(xì)胞間傳導(dǎo)機(jī)制的通路,它維持者細(xì)胞的增殖、分化和凋亡,在胚胎發(fā)育和細(xì)胞分化命運(yùn)的決定中發(fā)揮重要的作用。有研究表明Notch信號也參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,Notch受體和配體分子表達(dá)失調(diào)以及Notch信號的異常激活出現(xiàn)在一系列惡性腫瘤中。但Notch信號在肝癌形成過程的機(jī)制,目前尚不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)采用Real time-PCR法檢測Notch信號通路受體及配體分子的基因水平在人原發(fā)性肝癌組織

2、、癌旁硬化肝組織、肝腺瘤組織、正常肝組織中的表達(dá),以了解Notch信號通路在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程當(dāng)中所起的作用,并分析Notch信號通路受體及配體分子基因表達(dá)水平與肝癌患者術(shù)后生存的影響。
　　 方法:
　　 1研究對象40例原發(fā)性肝細(xì)胞癌癌組織、40例癌旁硬化肝組織,10例肝腺瘤組織及10例肝血管瘤周邊正常肝組織(作為對照)均來自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院肝膽外科2008年4月-2009年5月手術(shù)切除標(biāo)本。所有組織類型均經(jīng)河北

3、醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院病理科確診。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行任何形式的治療。
　　 2研究方法:收集人原發(fā)性肝癌臨床標(biāo)本,應(yīng)用Real time-PCR法檢測Notch1 mRNA、Notch2 mRNA、Notch3 mRNA、Notch4 mRNA、Jagged1mRNA、RBP-J mRNA在肝癌組織、癌旁硬化肝組織、肝腺瘤組織及正常肝組織中的表達(dá)情況。
　　 3隨訪肝癌患者生存情況,將肝癌患者臨床病理資料(性別、年齡、腫瘤直

4、徑、血清AFP、HBsAg、HBeAg、臨床分期、病理分級、伴有瘤栓或轉(zhuǎn)移)與總生存情況進(jìn)行匯總,并分析Notch信號通路受體及配體分子的基因表達(dá)水平與肝癌患者總生存情況的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1、肝癌組織與正常肝組織比較,Notchl mRNA(P=0.001),Jagged1 mRNA(P=0.003),RBP-J mRNA(P=0.005)表達(dá)量均有明顯升高;而肝癌組織Notch2 mRNA(P=0.069)

5、,Notch3 mRNA(P=0.535),Notch4 mRNA(P=0.491)表達(dá)與正常肝組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 肝癌組織與癌旁硬化肝組織比較,Notch1 mRNA(P=0.000),Notch2mRNA(P=0.005)表達(dá)量明顯升高;而肝癌組織Notch3 mRNA(P=0.209),Notch4 mRNA(P=0.068),Jagged1 mRNA(P=0.141),RBP-J mRNA(P=0.388)

6、表達(dá)與癌旁硬化肝組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 肝癌組織與肝腺瘤組織比較,Notch1 mRNA(P=0.036)表達(dá)量明顯升高,而肝癌組織Notch2 mRNA(P=0.611),Notch3 mRNA(P=0.696),Notch4 mRNA(P=0.343),Jagged1 mRNA(P=0.335),RBP-J mRNA(P=0.727)表達(dá)與肝腺瘤組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 癌旁硬化肝組織與正常肝組織比

7、較Jagged1 mRNA(P=0.042)表達(dá)明顯升高;而癌旁硬化肝組織Notchl mRNA(P=0.532),Notch2 mRNA(P=0.275),Notch3 mRNA(P=0.925),Notch4 mRNA(P=0.123),RBP-JmRNA(P=0.152)表達(dá)與正常肝組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 癌旁硬化肝組織與肝腺瘤組織比較Notch1 mRNA(P=0.882),Notch2mRNA(P=0.150

8、),Notch3 mRNA(P=0.490),Notch4 mRNA(P=0.176),Jagged1 mmqA(P=0.782),RBP-J mRNA(P=0.917)表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 肝腺瘤組織與正常肝組織比較Notch1 mRNA(P=0.648),Notch2mRNA(P=0.427),Notch3 mRNA(P=0.685),Notch4 mRNA(P=0.097),Jagged1 mRNA(P=0.44

9、6),RBP-J mRNA(P=0.195)表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、 Notch1 mRNA,Notch2 mRNA,Notch3 mRNA,Notch4 mRNA,Jagged1 mRNA及RBPJ mRNA在肝癌組織中的表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系:Notch1 mRNA、Notch3 mRNA、Notch4 mRNA、Jagged1 mRNA及RBPJmRNA在肝癌組織中的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤直徑、血清AFP

10、、HBsAg陰陽性、HBeAg陰陽性、瘤栓或轉(zhuǎn)移、肝癌臨床分期及病理分級均無關(guān)。Notch2 mRNA在肝癌組織中的表達(dá)與患者性別、年齡、血清AFP、HBsAg陰陽性、HBeAg陰陽性、瘤栓或轉(zhuǎn)移、肝癌臨床分期及病理分級均無關(guān);但在腫瘤直徑≥5cm的肝癌組織中Notch2 mRNA的表達(dá)強(qiáng)于腫瘤直徑＜5cm者,且Notch2 mRNA的表達(dá)與腫瘤直徑呈正相關(guān)(x2=5.000,P=0.025;r=0.354,P=0.025)3 Notc

11、h信號通路受體及配體分子的基因表達(dá)水平對肝癌患者術(shù)后生存的影響:單因素生存分析結(jié)果顯示,Notch1 mRNA表達(dá)(+)患者6個月累積生存率為75％,12個月累積生存率為65％,18個月累積生存率為55％,Notch1 mRNA表達(dá)(-)患者6個月累積生存率為85％,12個月累積生存率為80％,18個月累積生存率為50％,24個月累積生存率為43.7％,Notch1mRNA表達(dá)(+)及Notch1 mRNA表達(dá)(-)患者平均生存時間分別

12、為21.10月和20.55月,Notch1 mRNA表達(dá)水平與肝癌患者生存期無關(guān)(P=0.670)。
　　 Notch2 mRNA表達(dá)(+)患者6個月累積生存率為75％,12個月累積生存率為62.5％,18個月累積生存率為45.8％,Notch2 mRNA表達(dá)(-)患者6個月累積生存率為87.5％,12個月累積生存率為75％,18個月累積生存率為62.5％,24個月累積生存率為54.7％,Notch2 mRNA表達(dá)(+)及Not

13、ch2 mRNA表達(dá)(-)患者平均生存時間分別為19.33月和23.06月,Notch2 mRNA表達(dá)水平與肝癌患者生存期無關(guān)(P=0.387)。
　　 Notch3 mRNA表達(dá)(+)患者6個月累積生存率為78.9％,12個月累積生存率為68.4％,18個月累積生存率為47.4％,Notch3 mRNA表達(dá)(-)患者6個月累積生存率為81％,12個月累積生存率為71.4％,18個月累積生存率為57.1％,24個月累積生存率為5

14、0.8％,Notch3 mRNA表達(dá)(+)及Notch3 mRNA表達(dá)(-)患者平均生存時間分別為20.47月和21.11月,Notch3 mRNA表達(dá)水平與肝癌患者生存期無關(guān)(P=0.869)。
　　 Notch4 mRNA表達(dá)(+)患者6個月累積生存率為76.5％,12個月累積生存率為64.7％,18個月累積生存率為41.2％,Notch4 mRNA表達(dá)(-)患者6個月累積生存率為80％,12個月累積生存率為66.7％,18

15、個月累積生存率為53.3％，24個月累積生存率為42.7％,Notch4 mRNA表達(dá)(+)及Notch4 mRNA表達(dá)(-)患者平均生存時間分別為18.94月和18.93月,Notch4 mRNA表達(dá)水平與肝癌患者生存期無關(guān)(P=0.784)。
　　 Jagged1 mRNA表達(dá)(+)患者6個月累積生存率為80％,12個月累積生存率為60％,18個月累積生存率為40％,Jagged1 mRNA表達(dá)(-)患者6個月累積生存率為8

16、0％,12個月累積生存率為74.3％,18個月累積生存率為54.3％，24個月累積生存率為50.9％,Jagged1 mRNA表達(dá)(+)及Jagged1 mRNA表達(dá)(-)患者平均生存時間分別為18.40月和21.19月,Jagged1 mRNA表達(dá)水平與肝癌患者生存期無關(guān)(P=0.598)。
　　 RBPJ mRNA表達(dá)(+)患者6個月累積生存率為75％,12個月累積生存率為58.3％,18個月累積生存率為50％,RBPJ m

17、RNA表達(dá)(-)患者6個月累積生存率為82.1％,12個月累積生存率為71.4％,18個月累積生存率為53.6％,24個月累積生存率為49.7％,RBPJ mRNA表達(dá)(+)及RBPJ mRNA表達(dá)(-)患者平均生存時間分別為17.83月和21.30月,RBPJ mRNA表達(dá)水平與肝癌患者生存期無關(guān)(P=0.805)。
　　 多因素COX風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示,影響肝癌患者生存率的危險(xiǎn)因素是臨床分期(P=0.008),相對危險(xiǎn)度是

18、0.240,95％可信區(qū)間為0.084～0.685,未發(fā)現(xiàn)患者性別、年齡、腫瘤直徑、血清AFP、HasAg陰陽性、HBeAg陰陽性、瘤栓或轉(zhuǎn)移、病理分級及Notch1 mRNA,Notch2mRNA,Notch3 mRNA,Notch4 mRNA,Jagged1 mRNA,RBPJ mRNA的表達(dá)水平與肝癌患者的生存率有明顯的相關(guān)性。
　　 結(jié)論:
　　 1、Notch1 mRNA在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)顯著高于正常肝組