大鼠腦外傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及腦紅蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景及目的：腦紅蛋白(Neuroglobin，Ngb)是一種主要位于腦內(nèi)神經(jīng)元的攜氧球白，能可逆地結(jié)合O<,2>。在腦缺血缺氧時(shí)，腦紅蛋白在神經(jīng)元中表達(dá)增加，作為一種內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)因子可保護(hù)神經(jīng)元免受缺血性損害。目前，對腦組織Ngb mRNA表達(dá)的研究主要通過采用頸動脈阻斷的方法來建立缺血缺氧性腦損傷模型，而用外傷造成局灶性腦損傷模型來研究Ngb表達(dá)變化規(guī)律的方法，國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見報(bào)道。本研究采用硬膜外局部打擊的方法建立大鼠外傷性局

2、灶性腦損傷模型，研究傷后不同時(shí)間段和不同腦損傷區(qū)細(xì)胞凋亡和Ngb在mRNA水平表達(dá)變化規(guī)律，探討腦外傷后Ngb對神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制，以期為法醫(yī)學(xué)損傷時(shí)間推斷和顱腦損傷鑒定提供一種新的指標(biāo)。 方法：健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組和腦損傷組。腦損傷組大鼠予木棒以700的角度在硬膜外局部打擊的方法造成SD大鼠外傷性局灶性腦挫傷模型。 (1)檢測打擊后腦挫傷區(qū)腦血流變化情況。 (2)正常對照組直接斷頸處死大鼠

3、，腦損傷組于傷后的不同時(shí)間段斷頸處死大鼠，取腦組織應(yīng)用HE染色、TUNEL技術(shù)、半定量反轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(半定量RT-PCR)方法和圖像分析技術(shù)對腦外傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡、Ngb的表達(dá)變化規(guī)律進(jìn)行研究。 結(jié)果：(1)打擊后腦損傷區(qū)血流量變化為：先短時(shí)升高，然后下降，并維持在低于正常的水平。(2)腦損傷組大鼠的腦損傷區(qū)：Ngb表達(dá)在傷后15min開始下降，24h降至最低水平；打擊周邊損傷區(qū)Ngb表達(dá)于傷后15min即可見表達(dá)增高，

4、12h增高達(dá)峰值；非損傷區(qū)皮質(zhì)Ngb表達(dá)強(qiáng)于正常皮質(zhì)。(3)損傷后3h出現(xiàn)TUNEL陽性表達(dá)；損傷后6hTUNEL陽性表達(dá)增強(qiáng)；傷后12h在損傷周邊緣區(qū)出現(xiàn)峰值；傷后24小時(shí)陽性細(xì)胞分布范圍擴(kuò)大，損傷區(qū)TUNEI 陽性細(xì)胞率出現(xiàn)峰值；傷后16d，損傷區(qū)和損傷周邊緣區(qū)TUNEI陽性細(xì)胞率接近正常組；非損傷區(qū)皮質(zhì)TUNEI陽性細(xì)胞率接近正常組。 結(jié)論：在腦損傷急性期Ngb表達(dá)增強(qiáng)，神經(jīng)細(xì)胞凋亡增多，隨著時(shí)間的延長，Ngb表達(dá)減弱，神