毛細管電泳在多肽藥物有關物質分析中的應用研究.pdf

1、多肽藥物具有生物活性強、療效好、毒副作用低、用量少等特點，現(xiàn)已成為藥物研發(fā)的熱點。多肽藥物在合成及貯存過程中會產生一些雜肽，包括非對映異構體、乙?；a物、去甲酰胺產物等。這些雜質影響產品的質量與安全，需要采用合適的方法對其進行監(jiān)測。毛細管電泳具有分析速度快、分離效率高、樣品用量少、消耗少、操作簡便、分離模式多等優(yōu)點，已成為分離蛋白多肽藥物尤其是結構相似的蛋白多肽的強有力的手段。本論文主要以艾塞那肽和戈舍瑞林為研究對象，對毛細管電泳在多肽

2、藥物有關物質分析中的應用進行研究，結果表明毛細管電泳在多肽藥物有關物質分析中具有潛在的應用價值。本論文實驗主要由三大部分組成：
　　1.毛細管區(qū)帶電泳法測定艾塞那肽純度及其在穩(wěn)定性研究中的初步應用。
　　實驗建立毛細管區(qū)帶電泳法測定艾塞那肽純度，并將其應用于艾塞那肽穩(wěn)定性研究。實驗采用未涂層熔融石英毛細管（48.5 cm×50μm，有效長度40 cm），從運行緩沖液pH及濃度、分離電壓、溫度多個角度進行優(yōu)化，并加入乙腈添加劑

3、改善柱效和分離度。最終確立電泳條件為：運行緩沖液為200 mmol·L-1磷酸二氫鈉－磷酸氫二鈉溶液（pH6.2；含15％乙腈），分離電壓為20 kV，溫度25℃，檢測波長214 nm，壓力進樣5 kPa×10 s。結果表明艾塞那肽在0.05～4.0 mg·mL-1（r=0.9999）范圍內線性關系良好；檢測限為3.3μg·mL-1，定量限為8.0μg·mL-1；主峰遷移時間與純度的日內、日間精密度均小于2.0%。該方法與HPLC法比較

4、，純度測定結果基本一致，本法分離效果更好，分析時間縮短，能有效檢查艾塞那肽的純度。該方法可用于艾塞那肽的質量控制和穩(wěn)定性研究。
　　2.膠束電動毛細管色譜法測定戈舍瑞林有關物質。
　　實驗建立膠束電動毛細管色譜法對戈舍瑞林有關物質進行分析，成功將戈舍瑞林及結構相似的8種有關物質進行分離。在膠束電動毛細管色譜中，使用了新的添加劑組合（CTAB、β-CD和己烷磺酸鈉）來改善分離效率，將膠束、環(huán)糊精以及離子對試劑與分析物綜合作用，

5、相互競爭制約，使各分析物都獲得較好的分離效果。實驗采用未涂層熔融石英毛細管（48.5 cm×50μm，有效長度40 cm），對影響分離效率的因素如表面活性劑、添加劑（環(huán)糊精、己烷磺酸鈉）、緩沖液pH及濃度、儀器參數(shù)（溫度、電壓）進行優(yōu)化，確定電泳條件為：運行緩沖液為200 mmol·L-1 EACA溶液，含175 mmol·L-1 CTAB，3.0%w/vβ-CD，20 mmol·L-1己烷磺酸鈉，用乙酸調pH4.2；運行電壓-10 k

6、V，溫度20℃；壓力進樣5 kPa×10 s；檢測波長220 nm。該方法專屬性好，準確度高，重復性好，可以滿足戈舍瑞林有關物質檢測的要求。與RP-HPLC法相比，該方法解決雜質混合峰問題，且分析時間短。實驗還對戈舍瑞林穩(wěn)定性進行了表征，了解其雜質變化情況，為藥物的進一步研究提供參考。
　　3.毛細管電泳對促黃體素釋放激素類似物的分離研究。
　　實驗以結構相似的四種LHRH類似物（阿拉瑞林、亮丙瑞林、戈舍瑞林及曲普瑞林）為模

7、型分析物，建立了CE法對其進行分離。重點考察環(huán)糊精、表面活性劑、有機溶劑等添加劑對分離效果的影響，為結構相似肽的分離及多肽藥物有關物質的分析提供參考。實驗通過添加γ-CD改善分離效果，在毛細管區(qū)帶電泳模式下使四種LHRH類似物得到很好分離；同時還使用表面活性劑，在膠束電動毛細管色譜模式下進行分離。其中CTAB體系方法簡便，分離效果好，分析速度快；CHAPS體系通過加入有機溶劑也實現(xiàn)了四種LHRH類似物的分離。實驗顯示毛細管電泳在分離結構