B細胞淋巴瘤Fab噬菌體抗體庫的構建、篩選及鑒定.pdf

1、目的：噬菌體抗體庫技術是應用基因克隆方法把全套抗體基因呈現(xiàn)在噬菌體表面，通過抗原的親和力選擇和噬菌體擴增獲得特異性抗體基因。利用該技術可制備出多種特異性單克隆抗體片段，包括Fab、SeFv、dsFv及diabody。本研究旨在運用噬菌體抗體庫技術構建針對B細胞淋巴瘤Raji細胞系噬菌體抗體庫并從中篩選出特異性的Fab抗體。 方法：以Raji淋巴瘤細胞免疫BALB/c小鼠，ELISA檢測抗血清滴度后，分離抗體陽性的小鼠脾淋巴細胞，

2、提取總RNA。利用RT-PCR擴增抗體輕鏈κ基因和重鏈Fd段，經SacI/XbaI和XhoI/SpeI雙酶切，依次克隆入噬菌體載體pComb3H-SS的相應酶切位點，并電轉化大腸桿菌XL1-Blue，以輔助噬菌體VCSM13進行超感染，構建B細胞淋巴瘤Raji細胞系Fab噬菌體抗體庫。將Raji細胞包被6孔板，對噬菌體抗體庫進行5輪“吸附—洗脫—擴增”富集篩選。隨機挑選最后一輪富集篩選的單克隆在大腸桿菌XL1-Blue中進行可溶性表達，