氯丙嗪單獨及與順鉑聯(lián)合應用對人宮頸癌Hela細胞生長影響的研究.pdf

1、目的： 探討氯丙嗪(Chlorpromazine,CPZ)對人宮頸癌Hela細胞體外生長的抑制作用及其相關機制，同時觀察氯丙嗪聯(lián)合抗癌藥物順鉑(Cisplatin，DDP)對Hela細胞的體外作用。從而探討其抗癌療效，評價氯丙嗪治療宮頸癌的安全性、可行性，以期對藥物治療宮頸癌提供新思路、新方法。 方法：選取人宮頸癌Hela細胞為研究對象。實驗分三組，即氯丙嗪、順鉑、氯丙嗪與順鉑聯(lián)合組。1采用四甲基偶氮唑藍(tetrzol

2、ium-based colorimetric assay，MTT)比色法觀察不同濃度的氯丙嗪分別作用24h、48h、72h對Hela細胞增殖的影響，測定吸光度(OD)值。不同濃度的氯丙嗪作用Hela細胞48h后，流式細胞儀檢測凋亡細胞百分率、細胞周期的改變以及凋亡基因Bax、Bcl-2表達量的改變：DNA凝膠電泳分析DNA片段的變化。2不同濃度各組藥物作用48h后，采用MTT比色法檢測對Hela細胞增殖的影響，測定OD值； HE染色分析

3、細胞的形態(tài)學變化；鏈親和素免疫組化法(S-P法)檢測細胞p53的表達量變化。 結果： 1 MTT結果顯示：一定濃度的氯丙嗪在一定范圍內(nèi)能明顯抑制Hela細胞的增殖，且隨氯丙嗪濃度的升高和作用時間的延長，抑制作用明顯升高，呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性和時間依賴性。分別用氯丙嗪、順鉑及聯(lián)合用藥處理細胞48h后，氯丙嗪在濃度為10<'-7>mol／L、10<'-6>mol／L、10<'-5>mol/L、10<'-4>mol/L時對

4、Hela細胞的抑制率分別為22.74.％、41.69％、51.39％、67.45％，與對照組(加入等量培養(yǎng)液)比較，差異有非常顯著性(P<0.01)；順鉑在濃度為0.2 μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.0μmol/L時對Hela細胞的抑制率為43.88％、48.59％、61.49％和71.52％；兩者合用可大大提高對Hela細胞的抑制作用，抑制率分別為49.70％、63.52％、70.42％、76.15％，明顯

5、高于單純應用相同濃度的順鉑組。 2 流式細胞術結果分析：流式細胞儀檢測Hela細胞周期分布和凋亡顯示，10<'-7>、10<'-6>。10<'-5>、10<'-4>mol/L氯丙嗪處理Hela細胞48h后，隨藥物濃度的增加，G<,0>/G<,1>期細胞逐漸增多，S期和G<,2>/M期細胞則逐漸減少，即氯丙嗪可阻滯Hela細胞周期于G<,1>期，該作用呈劑量-效應依賴關系；10<'-7>、10<'-6>、10<'-5> mol/

6、L氯丙嗪作用Hela細胞48h后，出現(xiàn)典型的亞二倍體凋亡峰，依氯丙嗪濃度增大而逐漸增高，凋亡百分率分別為：5.03％、9.35％、23.85％；流式細胞儀間接分析細胞Bax、Bcl-2的蛋白表達顯示，10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>mol/L氯丙嗪作用Hela細胞48h后，Bax的熒光指數(shù)FI值隨處理濃度增大而逐漸增大，Bcl-2的熒光指數(shù)Fl值隨處理濃度增大而逐漸減小，對于每一種蛋白，其實驗組與對照組的FI值，均具有顯著

7、性差異(P<0.01)。 3 DNA凝膠電泳結果分析：10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>、10<'-4>mol/L氯丙嗪處理Hela細胞48h后，提取的DNA表現(xiàn)為典型的階梯狀排列條帶(DNA ladder)，而對照組則沒有出現(xiàn)。 4 HE染色結果分析：細胞核染藍紫，胞漿染粉紅色。隨藥物濃度增大，Hela細胞由不規(guī)則形漸變圓，出現(xiàn)核固縮、濃聚、斷裂后形成的凋亡細胞，呈致密紫藍色大小不等的顆粒。順鉑組，當濃

8、度為0.5μmol/L時，可見凋亡細胞；而兩藥聯(lián)合組，當順鉑濃度為0.2μmol/L時，便出現(xiàn)上述表現(xiàn)。 5 免疫組化法(S-P)分析Hela細胞p53基因蛋白表達變化的結果：P53蛋白主要表達于細胞核內(nèi)。氯丙嗪組，p53蛋白的表達呈升高趨勢，當濃度為10<'-7>mol/L時，p53蛋白染色細胞核的光密度值(OD)為0.1240±0.0551，當濃度升高至為10<'-5>mol/L時，OD值為0.2020±0.0626，與對

9、照組比較，差異具有顯著性(P<0.01)。順鉑組，p53蛋白的表達進一步上升，當濃度為0.5μmol/L時，光密度值為0.2260±0.0691，與對照組比較，具有顯著性差異(P<0.01)。兩藥聯(lián)合組p53蛋白的表達明顯增強，OD值升高明顯，即最低濃度(10<'-7>mol/L)氯丙嗪與最低濃度(0.2μmol/L)順鉑聯(lián)合作用后，OD值達到0.2560±0.0305，與對照組相比，具有極其顯著性差異(P<0.01)。與對應濃度順鉑處